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《喹賽多對恒化器模型中人腸道菌群的影響》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文喹賽多對恒化器模型中人腸道菌群的影響姓名：郭衛(wèi)革申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：袁宗輝201206喹賽多對恒化器模型中人腸道菌群的影響研究生：郭衛(wèi)革導(dǎo)師：袁宗輝教授(r華中農(nóng)業(yè)大學(xué)國家獸藥殘留基準(zhǔn)實(shí)驗室(HZAU)／農(nóng)業(yè)部食品安全評價重點(diǎn)開放實(shí)驗室，中國武漢430070)摘要喹賽多是喹嗯啉類一種新型的抗茵促生長劑，能促進(jìn)畜禽及水產(chǎn)動物生長、提高動物生產(chǎn)性能，并能有效降低疾病的感染率，安全低毒高效的特性使其在畜牧業(yè)中有較好的研究及應(yīng)用前景。雖然實(shí)驗室前期對喹賽多的代謝及殘留消除規(guī)律進(jìn)行了系統(tǒng)研究，毒理學(xué)方面的研究
2、顯示為一類安全性較高的藥物，而目前還未從微生物學(xué)安全性的角度進(jìn)行分析，因此為了保證食品安全，有必要考察喹賽多殘留是否對人的腸道菌群有負(fù)面效應(yīng)，對腸道菌群結(jié)構(gòu)、代謝活性、耐藥率及定植屏障功能的發(fā)揮是否有干擾，同時抗菌藥微生物影響作用又是食品安全評估中要求進(jìn)行的一項重要內(nèi)容，因此本試驗應(yīng)用離體恒化器模型，系統(tǒng)評價不同劑量喹賽多對人腸道微生物菌群的作用，豐富其微生物學(xué)安全性方面的資料，為喹賽多申報和進(jìn)一步推廣使用提供全面科學(xué)的資料。1喹賽多對腸道菌群的影響本研究采用FDA推薦使用的連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)研究喹賽多對人結(jié)腸菌群的影響。首先進(jìn)行喹賽多及其主要代謝物對
3、腸道菌株(大腸桿菌、腸球菌、雙歧桿菌、脆弱擬桿菌)的藥敏試驗，發(fā)現(xiàn)喹賽多主要代謝物Cyl、Cy2、Cy4、Cy6、Cyl0、Cyl2與原形喹賽多相比均沒有抗菌活性，因此模型系統(tǒng)中僅考慮喹賽多對結(jié)腸菌群的微生物學(xué)效應(yīng)。根據(jù)喹賽多對臨床分離的四種優(yōu)勢菌的藥敏的范圍是1．16pg／mL，設(shè)計了包含此范圍的一系列不同濃度0．5．128p,g／mL在厭氧箱中與糞樣孵育，通過對四種優(yōu)勢菌數(shù)量及兼性需氧厭氧菌(大腸桿菌、腸球菌)耐藥率考察，最終確定終濃度為41,tg／mL、161．tg／mL、3299／mL、1281．tg／mL在模型中進(jìn)行預(yù)試。模型接種糞樣后
4、第7d達(dá)到平衡，于第13d添加終濃度為499／mL、161．tedmL、321．tg／mL、128“g／mL的喹賽多，考察不同濃度作用下對四種優(yōu)勢菌(大腸桿菌、腸球菌、雙歧桿菌、脆弱擬桿菌)數(shù)量影響、短鏈脂肪酸(乙酸、丙酸、丁酸)影響及兼性需氧厭氧菌耐藥率變化(大腸桿菌、腸球菌)，連續(xù)給藥7天，第21d接種108CFU／mL華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2012屆碩士學(xué)位論文的鼠傷寒沙門氏菌lmL，接種三天，通過采樣計數(shù)沙門氏菌的數(shù)量來判斷腸道菌群的定植屏障功能是否破壞。在4I_tg／mL、16}tg／mL劑量下發(fā)現(xiàn)對腸道代表菌株的數(shù)量、短鏈脂肪酸、兼性需氧厭氧菌
5、耐藥率及沙門氏菌數(shù)量均在95％置信范圍內(nèi)，也就是說，這兩個劑量組對腸道菌群沒有影響。加藥期間這兩個劑量組下大腸桿菌數(shù)量保持在106CFU／mL濃度，腸球菌濃度104CFU／mL，雙歧桿菌、脆弱擬桿菌濃度101CFU／mL，均在95％置信范圍內(nèi)，也均在正常生理值范圍內(nèi)；對鼠傷寒沙門氏菌的數(shù)量計數(shù)分析，也發(fā)現(xiàn)4pg／mL、16I_tg／mL劑量下沙門氏菌數(shù)量與對照組相比沒有差異，在模型內(nèi)沒有增值的趨勢。相反地，32I-tg／mL、128Itg／mL這兩個劑量組對四種觀測指標(biāo)則有不同程度的影響。加藥期間對四種代表菌株數(shù)量均有影響，厭氧菌(雙歧桿菌、脆弱
6、擬桿菌)數(shù)量降低程度更明顯；大腸桿菌、腸球菌耐藥率增加；沙門氏菌數(shù)量與對照組相比有差異，在模型中有增值的趨勢，腸道菌群的定植抗力作用受到破壞；但是321．tg／mL、1281xg／mL劑量組并沒有影響短鏈脂肪酸的濃度，加藥期間乙酸、丙酸、丁酸的濃度均在95％置信范圍內(nèi)，可能與模型系統(tǒng)不能模擬腸道吸收功能有關(guān)，使短鏈脂肪酸濃度變化不是很明顯。在恒化器模型中通過對41．tg／mL、16pg／mL、321．tg／mL、128I_tg／mL劑量的考察結(jié)果顯示，161上g／mL劑量組對考察的指標(biāo)沒有影響，不會擾亂人腸道菌群的平衡。2大腸桿菌及腸球菌耐藥方式
7、分析模型加藥前期(第8—13d)及加藥期(第14．20d)從模型中采取樣品分離耐藥大腸桿菌和腸球菌，加藥前期321．tg／mL模型中分離大腸桿菌和腸球菌各10株；128pg／mL劑量組大腸桿菌和腸球菌各分離9株。加藥期間，32肛g／mL濃度下耐藥大腸桿菌和腸球菌各14株，128p．g／mL劑量組耐藥大腸桿菌和腸球菌各分離13株。首先對分離的耐藥大腸桿菌、腸球菌進(jìn)行耐藥表型分析，發(fā)現(xiàn)模型加藥前后分離大腸桿菌對喹嗯啉類藥物耐藥嚴(yán)重(MIC>641上g／mL)，此外還對p-內(nèi)酰胺類藥物耐(MIC>__12899／mL)。設(shè)計引物對分離耐藥大腸桿菌和腸球
8、菌進(jìn)行喹嗯啉類耐藥基因oqxAB擴(kuò)增，檢測我們臨床的分離的耐藥菌中是否有這種耐藥基因，目的片段oqxA和oqxB的大小分別是670bp和
