耐輻射球菌ppri蛋白細(xì)胞毒性及免疫毒性的研究

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1、七年制專業(yè)學(xué)位論文論文題目耐輻射球菌PprI蛋白細(xì)胞毒性及免疫毒性的研究畢潔靜研究生姓名楊占山指導(dǎo)教師姓名臨床醫(yī)學(xué)七年制專業(yè)名稱放射毒理學(xué)研究方向2012-6-15論文提交日期學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下,獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外,本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體,均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論

2、文作者簽名:畢潔靜日期:2012.5學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國家圖書館、中國社科院文獻(xiàn)信息情報(bào)中心、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所(含萬方數(shù)據(jù)電子出版社)、中國學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔,允許論文被查閱和借閱,可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文,可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索。涉密論文□本學(xué)位論文

3、屬在年月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文?論文作者簽名:畢潔靜日期:2012.5導(dǎo)師簽名:楊占山日期:2012.5耐輻射球菌PprI蛋白細(xì)胞毒性及免疫毒性的研究中文摘要中文摘要目的:pprI基因是耐輻射球菌中的特有基因,被認(rèn)為是耐輻射球菌DNA修復(fù)與保護(hù)途徑的總開關(guān),基因的表達(dá)產(chǎn)物PprI蛋白是一種促進(jìn)DNA修復(fù)的多效蛋白的誘導(dǎo)物。近年來我科室研究人員研究證實(shí)pprI基因轉(zhuǎn)染對哺乳動(dòng)物中子和γ射線急性放射損傷具有顯著的防治作用,原核表達(dá)純化取得的PprI蛋白,也被證實(shí)對γ射線輻射損傷小鼠具有一定的抗放作用。

4、本課題在此蛋白作用機(jī)制的基礎(chǔ)上,對其細(xì)胞毒性及免疫毒性作了初步的研究,為其以后的臨床應(yīng)用前安全性評價(jià)提供依據(jù),目前關(guān)于此蛋白的毒性研究,尚未見國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道。材料與方法:PprI蛋白由本實(shí)驗(yàn)室張永芹碩士通過原核表達(dá)純化,以人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞為作用對象,應(yīng)用MTT法檢測PprI蛋白對細(xì)胞的增殖、毒性作用,采用細(xì)胞克隆法檢測該蛋白對輻射細(xì)胞存活的影響,并繪制出劑量存活曲線。以ICR小鼠作為免疫對象,實(shí)驗(yàn)組分為生理鹽水免疫組和PprI蛋白免疫組,通過免疫器官臟器系數(shù)及T淋巴細(xì)胞亞群變化觀察此蛋白對小鼠免疫功

5、能的影響。結(jié)果:本課題初步研究得出,PprI蛋白濃度為2.5、5、10ug/ml范圍內(nèi)對細(xì)胞產(chǎn)生4抑制作用,且抑制作用與蛋白濃度呈正相關(guān),細(xì)胞密度0.5×10作用時(shí)間24h的細(xì)胞半抑制率IC50為6.40ug/mL。照射劑量為6Gy時(shí),PprI蛋白濃度為100、200、400、600ng/ml范圍內(nèi)對細(xì)胞產(chǎn)生增殖作用,蛋白濃度400ng/mL作用36h時(shí)增殖作用最為顯著。由多靶單擊模型擬合的細(xì)胞存活曲線得知,PprI蛋白組D0值為1.33,Dq值為1.17,N值為2.41,SF2值為0.51,各值均高于

6、單純照射組。在小鼠免疫及免疫后三周的觀察期間內(nèi),計(jì)算免疫器官臟器系數(shù)可知,免疫初期即初次免疫后14天,高劑量組腎臟重量系數(shù)顯著低于生理鹽水對照組(P<0.05),1中文摘要耐輻射球菌PprI蛋白細(xì)胞毒性及免疫毒性的研究中、高劑量組胸腺重量系數(shù)均顯著高于生理鹽水對照組(P<0.05);免疫末期即末次免疫后3天,低劑量組腎臟重量系數(shù)顯著低于生理鹽水對照組(P<0.05),高劑量組胸腺重量系數(shù)顯著高于生理鹽水對照組(P<0.05);恢復(fù)期即末次免疫后3周,高劑量組肝臟重量系數(shù)顯著高于生理鹽水對照組(P<0.0

7、5),低劑量組胸腺重量系數(shù)顯著高于生理鹽水對照組(P<0.05)。由T淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果+可知,末次免疫后3天,中劑量組小鼠脾臟CD3T細(xì)胞含量顯著高于生理鹽水對++照組(P<0.05),高劑量組CD3CD8T細(xì)胞含量顯著高于生理鹽水對照組(P<0.05),高劑量組CD4/CD8比值顯著低于生理鹽水對照組(P<0.05)。結(jié)論:1.研究得知PprI蛋白濃度達(dá)到2.5、5、10ug/ml時(shí)對細(xì)胞增殖產(chǎn)生抑制作用,4且抑制作用與蛋白濃度呈正相關(guān),細(xì)胞密度0.5×10作用時(shí)間24h的細(xì)胞半抑制率IC50為6

8、.40ug/mL。PprI蛋白濃度為100、200、400、600ng/ml時(shí)對細(xì)胞產(chǎn)生增殖作用,蛋白濃度400ng/mL作用36h時(shí)增殖作用最為顯著。2.由多靶單擊模型擬合劑量存活曲線及所得放射生物學(xué)參數(shù)得知,PprI蛋白可以使細(xì)胞的平均致死劑量增大,放射抗拒性增強(qiáng),細(xì)胞修復(fù)能力增強(qiáng)。3.PprI蛋白對小鼠免疫器官的影響主要表現(xiàn)在中樞免疫器官胸腺及主要臟器腎臟,且刺激具有可逆性。對脾臟、肝臟基本無毒性作用。+++4.PprI蛋白一定程度上

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