骨橋蛋白在腎癌中的表達(dá)及意義

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1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文骨橋蛋白在腎癌中的表達(dá)及意義姓名：曹赫然申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：張愛莉201203中文摘要骨橋蛋白在腎癌中的表達(dá)及意義摘要腎癌是常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，近年該病的發(fā)病率呈升高趨勢。腎癌細(xì)胞具有增殖、遷移和侵襲能力，這些作用是腎癌擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移的生物學(xué)基礎(chǔ)。因此在更深層次特別是在分子水平研究腎癌的增殖、遷移，對于腎癌的發(fā)病機(jī)制、進(jìn)展過程及治療方案均有重要意義。骨橋蛋白(osteopontin，OPN)是一種分泌型糖基化磷蛋白，該蛋白參與構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)成分，并與多種

2、細(xì)胞膜蛋白發(fā)生偶聯(lián)，參與細(xì)胞的遷移及運(yùn)動過程。該蛋白的異常表達(dá)己被證明與多種疾病有關(guān)。然而，OPN與腎癌的關(guān)系尚不清楚，本研究通過探討OPN與腎癌增殖、侵襲的關(guān)系，旨在揭示該蛋白在腎癌發(fā)病過程中的重要作用，并為今后腎癌的藥物治療提供新的靶點(diǎn)。方法：1免疫組織化學(xué)染色將組織切片脫蠟至水，使用SP三步法檢測組織切片中增殖細(xì)胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)及OPN的表達(dá)變化2組織總RNA提取及RT-PCR反應(yīng)提取各組織的總RNA，經(jīng)定量、電泳驗純后進(jìn)行

3、逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，之后將反應(yīng)產(chǎn)物用特異引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。經(jīng)電泳后半定量檢測PCNA及OPN的表達(dá)變化?！?人腎癌786．O細(xì)胞培養(yǎng)‘將786．O細(xì)胞傳代培養(yǎng)，待細(xì)胞生長至80％時進(jìn)行實(shí)驗。4細(xì)胞增殖實(shí)驗使用MTT法對各組細(xì)胞的增殖活力進(jìn)行測定，檢測OD570值比較各組間增殖活力差異。采用細(xì)胞計數(shù)法，對各組細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，以驗證OPN對786．O細(xì)胞增殖的影響。5細(xì)胞侵襲實(shí)驗將各組細(xì)胞傳代至Transwell的上室，在下室浸沒的溶液中并加入不同濃度的OPN，計數(shù)侵襲入下室薄膜上的細(xì)胞個數(shù)。中文摘要結(jié)果：1

4、OPN表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞增殖能力相關(guān)免疫組織化學(xué)及RT-PCR分析結(jié)果表明，PCNA及OPN在腎癌組織中的表達(dá)均高于癌旁腎組織(P<0．01)。且PCNA及OPN的表達(dá)強(qiáng)度隨臨床分級的升高而增強(qiáng)。PCNA的表達(dá)水平與OPN表達(dá)水平有關(guān)(P

5、襲能力Transwell實(shí)驗結(jié)果表明，用不同濃度的OPN處理786一O腎癌細(xì)胞，侵襲入下室的細(xì)胞數(shù)目明顯增多(P

6、tionandInvasionofRenalCamCellsancerellsABSTRACTRenalcancerisacommonurologicalcarcinoma，mostofwhichisclearcellcarcinoma．Similarasmostmalignanttumors，therenalcancercellsalsohavepotentproliferationandinvasionabilities．However,themechanismsofproliferation

7、andinvasionofcancercellsarestillnotveryclear．Therefore，researchesbasedonmolecularlevelaremeaningfultounderstandmoreaboutthesemechanisms．Osteopontin(OPN)isasecretedphosphoprotein，whichhasbeenverifiedasafactorrelatedwithmigration，adherenceandinvasioninv

8、arioustissues．However,therelationshipbetweenOPNandrenalcancerstillremainsunknown．Thus，inthepresentresearch，weinvestigatedtheexpressionofOPNinrenalcancertissuesandanalyzetherelationshipbetweenOPNandproliferation．Besides，wealsoverifiedtheeffects