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《骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞移植在肝纖維化大鼠肝內(nèi)的示蹤研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、河南大學(xué)碩士學(xué)位論文骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞移植在肝纖維化大鼠肝內(nèi)的示蹤研究姓名：劉冉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：于靜201205摘要目的肝纖維化的遷延病情使其在功能件HT細(xì)胞相對(duì)減少的同時(shí)，存在細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)的過(guò)度沉移{，從而導(dǎo)致盯矣狀隙的縮窄、肝小血管的閉塞，促進(jìn)向肝硬化進(jìn)展。而Il前公認(rèn)，內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)能參與血管的新生和修復(fù)。但日前大多數(shù)學(xué)者均基于健康骨髓或外周m獲得EPCs，從疾病個(gè)體能否獲得正常EPCs的研究甚少，從而限制了自體細(xì)胞移植的臨床應(yīng)用。本研究擬針對(duì)肘
2、纖維化人鼠，對(duì)其骨髓源性EPCs的分離、誘導(dǎo)和培養(yǎng)，嘗試為自體細(xì)胞移植治療肝纖維化提供良好的供體細(xì)胞，并建立PKIl26熒光標(biāo)記的肝纖維化人鼠骨髓源性EPCs的方法，觀察其移植后在肝纖維化大鼠肝內(nèi)的遷移和分化情況。旨在為治療肝纖維化的臨床J；v．Hj提供理論依據(jù)和實(shí)踐基礎(chǔ)。方法應(yīng)用IJq氯化碳(carbontetrachloride，CCl4)皮下注射建立毒物誘導(dǎo)型肝鄉(xiāng)下維化火鼠模型，通過(guò)密度梯皮離心法從肝纖維化人鼠骨髓巾分離單個(gè)核細(xì)胞，并JT】著速貼壁培養(yǎng)法進(jìn)行體外誘導(dǎo)培養(yǎng)成EPCs；流式細(xì)胞儀檢測(cè)其表型和純度，乙?；兔芏戎鞍缀徒Y(jié)合荊麗凝集素雙熒光染色鑒定其吞噬功能，血管腔形成
3、實(shí)驗(yàn)鑒定其成血管功能。PKH26熒光體外標(biāo)記EPCs，通過(guò)激光共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞分析儀等柃溯JPKH26熒光標(biāo)記率，觀察熒光標(biāo)記對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的影響；將PKH26熒光標(biāo)記的內(nèi)皮祖細(xì)胞經(jīng)尾靜脈移植入肝纖維化大鼠體內(nèi)，觀察其在肝內(nèi)的遷移示蹤情況，并用免疫熒光法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物CD3l和血管性假血友病因子(yonwillebrandfactor，vWF)的表達(dá)。評(píng)價(jià)外源性EPCs在肝纖維化體內(nèi)向內(nèi)源性血管壁遷移的傾向性。結(jié)果通過(guò)密度梯度離心分離法及差速9lIIi壁培養(yǎng)法，能從盯纖維化大鼠竹髓細(xì)胞中成功誘導(dǎo)并分化為具有特征件表型和功能的EPCs。細(xì)胞培養(yǎng)14天后呈現(xiàn)鋪路石樣結(jié)構(gòu)；63．
4、9％的EPCs為CDl33NEGFR2雙陽(yáng)性細(xì)胞；EPCs具有成熟內(nèi)皮細(xì)胞的吞噬功能，并能形成穩(wěn)定的JflL管腔樣結(jié)構(gòu)。應(yīng)用PKH26熒光標(biāo)記的細(xì)胞呈紅色熒光，標(biāo)記ljfl性率為96．65％；標(biāo)記細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，同末標(biāo)記細(xì)胞卡兀比，生長(zhǎng)曲線無(wú)明顯改變；PKH26標(biāo)記的EPCs經(jīng)尾靜脈移植入肝纖維化大鼠體內(nèi)后，可順利遷移并種植于肝臟，并且這些細(xì)胞主要聚集于沿纖維分布的血管內(nèi)皮和肝小葉內(nèi)的寞內(nèi)皮，并表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性抗原CD31和vWF。提示外源性EPCs有向內(nèi)源性血管肇遷移的傾向性，從而為血管的修復(fù)和霞構(gòu)奠定了基礎(chǔ)。結(jié)論通過(guò)密度梯度離心分離法及差速貼壁培養(yǎng)法，肝纖維化大鼠骨髓細(xì)胞能被
5、成功誘導(dǎo)ji：分化為具有特征性表型和功能的EPCs。利用PKH26町在體外成功標(biāo)記腫纖維化大鼠骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞，該細(xì)胞在移植入片f纖維化大鼠體內(nèi)后，．口J‘遷移至肝內(nèi)血管周圍并向成熟內(nèi)皮細(xì)胞分化。關(guān)鍵詞內(nèi)皮祖細(xì)胞，細(xì)胞移植，PKH26，示蹤，肝纖維化ABSTRACTOBJECTIVEProtracringpathogeneticconditionofhepaticfibrosiszwillcausefunctionalhepatocytes，decreasingre
6、atively．a(chǎn)ndmeanwhileleadtOoverlydepositingofextracellularm
7、atrix(ECM)，itwilIcause響rroWofsinusoidalshapegapan．_．_docclusionofsmallhepaticVa5cuJar,p：omoy．曼hepa‘。ccirrhosis．Cu丌enllystudieshaveindicatedthatendothelialprogenitorcells(EPCs)caD．participateinVe55e15ofnewbomandrepalr．However'EPCsarealmostisolatedbyhealthybonemarroworperipheralbloodnow,ve∥fewtos
8、tudywhetherEPCscouldgetfromdiseasesindividual，therebytheclinicalapplicationofautoIogousceIItransplantationislimited．Here，wetakeliver-fibrosisratsasstudyobject，isolating，inducingandt髓iningtotheirbonemarrow．derivedendothelialprogeni
