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《同種異體移植的骨髓基質(zhì)干細胞對肝損傷的修復(fù)作用及示蹤的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文同種異體移植的骨髓基質(zhì)干細胞對肝損傷的修復(fù)作用及示蹤的研究姓名：陳小伍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)普通外科學(xué)指導(dǎo)教師：方馳華20060420中文摘要且上述實驗方法因需處死動物獲取肝臟組織標本等而不能應(yīng)用于人體研究。因此，若能用一種標記物標記BMSCs，并用簡單的方法對同種異體移植的BMSCs進行追蹤，將對研究BMSCs移植入體內(nèi)后的定居、遷移、分化及對肝病的治療作用大有幫助，并為追蹤其他細胞在體內(nèi)的類似作用建立一個良好的標記方法和技術(shù)平臺。最近出現(xiàn)的一種新的標記技術(shù)就是對細胞進行磁性標記，并利用磁共振成像(MRI)技術(shù)追蹤其在體內(nèi)的定居、遷移
2、及分化等信息。其中應(yīng)用最廣泛的是菲立磁(Feridex)。國內(nèi)外眾多科學(xué)家已應(yīng)用此方法追蹤同種異體移植的Feridex標記的細胞在腦內(nèi)的定位和遷移等。至于采用Feridex標記BMSCs，進行大鼠同種異體移植，并使用MRI追蹤其在大鼠肝臟的定位及對肝損傷的修復(fù)作用，目前未見報道。目的使用Feridex標記SD大鼠BMSCs，研究標記后細胞的存活、增殖及向肝細胞分化能力的變化，建立不影響B(tài)MSCs增殖及向肝細胞分化能力的最佳標記方案；通過門靜脈、肝局部實質(zhì)、尾靜脈3種途徑同種異體移植Feridex標記的BMSCs，采用MRI技術(shù)在移植后不同時間分別對sD大鼠肝臟進行掃描
3、，探索對機體無毒、無害且能在肝內(nèi)有效追蹤的最佳移植方案和追蹤方案；用CCl。制成急性化學(xué)性肝損傷模型，同種異體移植Feridex標記的BMSCs，利用MRI技術(shù)進行追蹤，并結(jié)合血清學(xué)、肝臟組織病理學(xué)和細胞凋亡等相關(guān)指標，研究移植細胞在肝損傷環(huán)境下的定居、移行及對肝損傷的修復(fù)作用，最終為Feridex標記的BMSCs在大鼠肝內(nèi)的追蹤提供可行性報告，并為同種異體移植BMSCs為基礎(chǔ)的肝損傷治療提供理論依據(jù)。方法1．采用percoll梯度離心法獲取BMSCs，體外傳代、培養(yǎng)、純化并通過流式細胞術(shù)檢測CD29、CD44、CD45和體外誘導(dǎo)成骨細胞、堿性磷酸酶底物直接染色法鑒定
4、。Ⅱ‘t●，■博士學(xué)位論文2．比較用含不同濃度血清(分別為20％血清、50％血清、90％血清)的凍存液凍存不同時間(2周、4周、8周)的BMSCs復(fù)蘇后的存活率(胎盤藍排除實驗)與貼壁率(細胞計數(shù)法)、增殖(噻唑藍(MTT)法)、向肝細胞分化能力(在BMSCs與肝細胞共培養(yǎng)的第8d和第16d以免疫細胞化學(xué)法分別檢測AFP、白蛋白的表達)，探討不同凍存條件對BMSCs復(fù)蘇后存活、增殖及向肝細胞分化能力的影響。氣．3．使用Feridex標記sD大鼠BMSCs，采用普魯士蘭染色、電鏡、胎盤藍排除實驗、噻唑藍(MTT)法繪制生長曲線等鑒定Feridex標記BMSCs的效率、標
5、記后細胞的存活、增殖能力。檢測標記后BMSCs的誘導(dǎo)分化率評估其向肝細胞分化能力，建立不影響其增殖及肝向分化能力的最佳標記方案。4．通過門靜脈、肝局部實質(zhì)、尾靜脈等途徑將Feridex標記的BMSCs同種異體移植至IJSD大鼠體內(nèi)，采用MRI技術(shù)(三種序列：SE—T2WI、FSE—T2WI、GRE—T2WI序列)對移植前6h、移植后6h、1wk、3wk、5Wk時的大鼠肝臟進行掃描并比較分析，探索能在肝內(nèi)有效追蹤的最佳移植方案和追蹤方案。5．利用CCl4制作SD大鼠急性化學(xué)性肝損傷模型，通過MRI技術(shù)追蹤肝實質(zhì)局部同種異體移植入SD大鼠肝內(nèi)的Feridex標記的BMSC
6、s的定位、遷移，并檢測大鼠血清ALT、AST、TG、A／G、Bil、SOD、MI)A、AKP、Hyp、Fe“和組織SOD、MDA、GSH-PX、Hyp水平，結(jié)合肝臟組織病理學(xué)和細胞凋亡等相關(guān)指標，研究BMSCs在肝損傷大鼠的定位、遷移及對大鼠肝損傷的修復(fù)作用。結(jié)果：1．用血清濃度為90％的凍存液經(jīng)不同時間凍存后的BMSCs復(fù)蘇后的存活率、貼壁率最高，且其增殖及向肝細胞的分化能力與正常對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義；而血清濃度為50％及20％時，凍存的BMSCs復(fù)蘇后的存活率、貼壁率、增殖及向肝細胞的分化能力低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2．標記培養(yǎng)基qbFe3+濃度為11
7、．2、16．8ug／ml時，90％以上的細胞普魯士蘭染色呈陽性，透射電鏡可見鐵顆粒位于BMSCs胞漿中；標記后的BMSCs生長、增Ⅲ中文摘要殖及向肝細胞分化的能力與未標記的BMSCs差異無統(tǒng)計學(xué)意義。Fe“濃度為5．6ug／ml時，普魯士蘭染色陽性率<60％；Fe”濃度為22．4ug／ml時培養(yǎng)基中死細胞增多，且誘導(dǎo)分化后AFP與白蛋白陽性率低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3．MRI掃描正常大鼠肝臟時，以GRE—T2WI序列掃描的圖像非常模糊，重影明顯。以FSE—T2WI序列掃描的圖像較GRE—T2WI圖像較清晰，但重影仍明顯。上述兩序列均不能清晰顯示
