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1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文沙眼衣原體感染誘生活性氧對(duì)L929細(xì)胞壞死的影響姓名：劉文文申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：呂建新；周曉輝2012-05-12沙眼衣原體感染誘生活性氧對(duì)L929細(xì)胞壞死的影響中文摘要目的沙眼衣原體是目前性傳播疾病的最主要的細(xì)菌性病原體，其感染還可以導(dǎo)致其他多種疾病。因此，衣原體與宿主細(xì)胞相互作用的分子機(jī)制成為國內(nèi)外醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。現(xiàn)有研究提示，病原體感染過程中抑制或誘導(dǎo)宿主細(xì)胞的死亡對(duì)其感染復(fù)制、致病及預(yù)后有深刻的影響。本課題即擬觀察沙眼衣原體感染誘生的活性氧(Reactiveoxygenspecies，ROS)對(duì)L9
2、29細(xì)胞壞死的影響，從而為深入探討沙眼衣原體感染與細(xì)胞死亡通路相互作用的機(jī)制提供初步線索。方法1在Hela229細(xì)胞中培養(yǎng)沙眼衣原體小鼠生物型(Ch腸mydiaMurida朋m)，以姬姆薩染色方法對(duì)進(jìn)行檢測(cè)、應(yīng)用不連續(xù)密度梯度方法純化沙眼衣原體及使用間接免疫熒光方法測(cè)定沙眼衣原體滴度(即FU)。2以Cmu舭m感染L929細(xì)胞，對(duì)照組未感染。感染后0h、12h、24h收集L929細(xì)胞，應(yīng)用CM-H2DCFDA染色流式檢測(cè)ROS的產(chǎn)生。3用Cmurida似m感染L929細(xì)胞，對(duì)照組未感染。感染后0h、12h、24h收集L929細(xì)胞，應(yīng)用Propodiumi
3、odide(PI)+AnnexinV．FⅡtC染色流式檢測(cè)細(xì)胞壞死率。4用Cmurida丌lm感染L929細(xì)胞，對(duì)照組未感染。感染后Oh、12h、24h收集L929細(xì)胞提取總的RNA，熒光定量檢測(cè)沙眼衣原體16SrRNA的表達(dá)。5DPI處理感染Cmurida刪m的L929細(xì)胞，對(duì)照組為感染Cmurida刪m的L929細(xì)胞和未感染的L929細(xì)胞。收集細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞ROS、Caspase一1活性、沙眼衣原體16SrRNA、細(xì)胞壞死率。結(jié)果1C．，，z甜r池朋聊感染L929細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)在12h、24h兩個(gè)檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)，感染組的ROS、細(xì)胞壞死率、沙眼衣原體16Sr
4、RNA水平與未感染對(duì)照組相比都有顯著增加，而且隨時(shí)間延長增加趨勢(shì)加大(P<0．05)。2用藥物DPI處理感染的L929細(xì)胞，DPI處理組與未處理對(duì)照組的相比不但ROS水平降低，而且伴隨著細(xì)胞壞死率、C唧ase一1活性、沙眼衣原體16SrRNA水平的降低(P<0．05)。溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文結(jié)論綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)沙眼衣原體感染誘生的活性氧一定程度上促進(jìn)了L929細(xì)胞的壞死。關(guān)鍵詞沙眼衣原體；活性氧；細(xì)胞壞死溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文ReactiveoxygenspeciesmediatednecrosisofhostcellsinducedbyChlam
5、ydiatrachomatisinfectionABSTRACTobjectiveInhibitionorinductionofhost-celldeathhasbeenreportedformanypathogensandisthoughttoplayanimportantroleinpropagationorpathogenesisofinfection．Asanmostcommonagentofbactorialsexually-transmitteddiseaseintheworld，Chlamydiatrachomatisinteractin
6、gwithcelldeathpathwayismuchaccountedofresearchesinthefiledofinfectiousdiseases．Therefore，thisworkaimedtoexploretheinfluenceofreactiveoxygenspeciestonecrosisofL929cellsinducedbyChlamydiatrachomatisinfection．Method1ChlamydiaMuridarumwasamplifiedinHeLacells；GiemsastainingWasapplied
7、toexaminetheinclusionsofC．muridarum；ElementarybodiesofChlamydiaMuridarumwerepurifiedbydiscontinueddensitygradientcentrifugation；andbacterialloadsweredeterminedbyindirectimmunofluorescence．2L929cellswereinfectedormock—infectedbyChlamydiamuridarum，andcollectedattheOh，12hand24hpost
8、-infection．ROSproductionwasmeasuredbyROS-sensti
