小鼠沙眼衣原體肺炎的誘生及檢測(cè)

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1、小鼠沙眼衣原體肺炎的誘生及檢測(cè)【關(guān)鍵詞】小鼠沙眼衣原體肺炎　　【摘要】目的探討沙眼衣原體小鼠肺炎感染模型的建立及檢測(cè)。方法用沙眼衣原體小鼠肺炎株（MoPn）鼻腔吸入感染C57BL/6小鼠。用過(guò)氧化物酶連接的鼠抗衣原體脂多糖單抗染色及RT-PCR，檢測(cè)衣原體在小鼠肺組織的生長(zhǎng);通過(guò)肺組織髓過(guò)氧化物酶檢測(cè)，確定肺炎癥細(xì)胞類型。結(jié)果一定劑量的衣原體MoPn經(jīng)鼻腔吸入可引起小鼠衣原體肺炎，以肺組織衣原體生長(zhǎng)及肺組織大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為特征。結(jié)論小鼠可作為研究沙眼衣原體肺炎有價(jià)值的動(dòng)物模型?！　　娟P(guān)鍵詞】沙眼衣原體小鼠肺炎髓過(guò)氧化物酶E

2、stablishmentanddetectiontoChlamydiatrachomatispneumonitisofthemouse　　【Abstract】ObjectiveToestablishamousemodelofChlamydiatrachomatispneumonitisandinvestigatethedetectivemethod.MethodsPneumonitisydiatrachomatismousepneu-monitis（MoPn）biovarinC57BL/6mice.Chlamydiagroin

3、edbychlamydiainfectivityandchlamydiamRNAexpressioninthelungs.Lunginflammatorycelltypeinedbylungmyeloperoxidaseassay.TheinfectionedbyinoculatingHela229cellmonolayerogenatesfolloydiaLPSmAb.ResultsIntranasallyinfectedatisMoPninmiceresultedinChlamydiamousepneumonitisfea

4、turedbychlamydiagroassiveinfiltrationofneutrophilsinthelung.ConclusionMicemayserveasausefulanimalmodelforthestudyoftheChlamydiatrachomatispneumonitis.　　【Keyydiatrachomatismousepneumonitismyeloperoxidase　　沙眼衣原體小鼠肺炎菌株（MoPn）是小鼠肺炎的天然病原體，最初是從小鼠肺組織分離得到的，所以MoPn感染的小鼠模型最常用于研

5、究衣原體體內(nèi)感染。本研究以MoPn通過(guò)呼吸道感染易感小鼠，并通過(guò)檢測(cè)衣原體在肺組織中的生長(zhǎng)及肺組織炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，對(duì)小鼠衣原體肺炎進(jìn)行檢測(cè)和鑒定。　　1材料與方法　　1.1沙眼衣原體菌株MoPn生長(zhǎng)于HeLa229細(xì)胞，用不連續(xù)密度梯度離心法純化衣原體，進(jìn)行活性測(cè)定后用于感染小鼠?！　?.2感染小鼠6～8周齡雌性C57BL/6小鼠（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病研究所提供），在微麻狀態(tài)下鼻腔內(nèi)吸入40μl含1×103包涵體形成單位（IFU）的MoPn?！　?.3肺組織上清液中衣原體活性測(cè)定無(wú)菌采集小鼠肺組織右葉，制備成組織勻漿，離心。用

6、肺組織上清液滴定HeLa細(xì)胞單層。用連接有過(guò)氧化物酶的鼠抗衣原體脂多糖單抗（anti-LPSmAb）（Virostat）染色，以鑒定衣原體的感染性，感染強(qiáng)度以IFU表示［1］?！　?.4肺組織髓過(guò)氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）檢測(cè)［2］制備肺組織勻漿，沉淀物超聲粉碎。上清液與25μlTMB底物液反應(yīng)，以人髓過(guò)氧化物酶做標(biāo)準(zhǔn)品，在全自動(dòng)酶標(biāo)儀上讀取650nmOD值?！　?.5MoPnmRNA的表達(dá)RT-PCR檢測(cè)小鼠肺組織沙眼衣原體MoPnmRNA表達(dá)?！　?結(jié)果　　2.1MoPn感染后小鼠肺組織衣原體生長(zhǎng)見(jiàn)

7、圖1。圖1顯示，在感染后第2天，小鼠肺組織可檢測(cè)到衣原體生長(zhǎng)，IFU值增高。衣原體生長(zhǎng)在感染后第7天達(dá)高峰，4只小鼠肺組織均檢測(cè)到衣原體MoPnmRNA表達(dá)，見(jiàn)圖2?！　D1衣原體感染C57BL/6小鼠肺組織衣原體活性略　　圖2小鼠呼吸道沙眼衣原體感染后肺組織衣原體MoPnmRNA表達(dá)略　　2.2中性粒細(xì)胞髓過(guò)氧化物酶（MPO）檢測(cè)C57BL/6小鼠呼吸道感染衣原體MoPn后第2天，肺組織MPO活性明顯增高（P<0.01），至第3天達(dá)高峰，以后逐漸下降，感染后21天恢復(fù)正常水平（圖未顯示）。說(shuō)明中性粒細(xì)胞于感染后第2天在

8、肺組織大量聚集。　　3討論　　沙眼衣原體是影響人類健康的重要病原體，隨著臨床衣原體感染性疾病的日益增多，迫切需要深入了解衣原體感染的保護(hù)性免疫學(xué)機(jī)制。近年來(lái)，使用感染的動(dòng)物模型在闡明衣原體感染的免疫生物學(xué)上取得了重要的研究進(jìn)展。本研究采用適宜劑量的沙眼衣原體小鼠肺炎株，通過(guò)鼻