小鼠沙眼衣原體肺炎的誘生及檢測

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1、小鼠沙眼衣原體肺炎的誘生及檢測【關(guān)鍵詞】小鼠沙眼衣原體肺炎　　【摘要】目的探討沙眼衣原體小鼠肺炎感染模型的建立及檢測。方法用沙眼衣原體小鼠肺炎株（MoPn）鼻腔吸入感染C57BL/6小鼠。用過氧化物酶連接的鼠抗衣原體脂多糖單抗染色及RT-PCR，檢測衣原體在小鼠肺組織的生長;通過肺組織髓過氧化物酶檢測，確定肺炎癥細(xì)胞類型。結(jié)果一定劑量的衣原體MoPn經(jīng)鼻腔吸入可引起小鼠衣原體肺炎，以肺組織衣原體生長及肺組織大量中性粒細(xì)胞浸潤為特征。結(jié)論小鼠可作為研究沙眼衣原體肺炎有價(jià)值的動物模型。　　【關(guān)鍵詞】沙眼衣原體小鼠肺炎髓過氧化物酶Esta

2、blishmentanddetectiontoChlamydiatrachomatispneumonitisofthemouse　　【Abstract】ObjectiveToestablishamousemodelofChlamydiatrachomatispneumonitisandinvestigatethedetectivemethod.MethodsPneumonitiswasproducedbyintranasalinoculationofChlamydiatrachomatismousepneu-monitis（MoPn

3、）biovarinC57BL/6mice.ChlamydiagrowthinthelungsweredeterminedbychlamydiainfectivityandchlamydiamRNA6expressioninthelungs.Lunginflammatorycelltypewasdeterminedbylungmyeloperoxidaseassay.TheinfectionwasconfirmedbyinoculatingHela229cellmonolayerwithlunghomogenatesfollowedb

4、yHRPconjugateanti-ChlamydiaLPSmAb.ResultsIntranasallyinfectedwithC.trachomatisMoPninmiceresultedinChlamydiamousepneumonitisfeaturedbychlamydiagrowthandmassiveinfiltrationofneutrophilsinthelung.ConclusionMicemayserveasausefulanimalmodelforthestudyoftheChlamydiatrachomat

5、ispneumonitis.　　【Keywords】Chlamydiatrachomatismousepneumonitismyeloperoxidase　　沙眼衣原體小鼠肺炎菌株（MoPn）是小鼠肺炎的天然病原體，最初是從小鼠肺組織分離得到的，所以MoPn感染的小鼠模型最常用于研究衣原體體內(nèi)感染。本研究以MoPn通過呼吸道感染易感小鼠，并通過檢測衣原體在肺組織中的生長及肺組織炎癥細(xì)胞的浸潤，對小鼠衣原體肺炎進(jìn)行檢測和鑒定?！　?材料與方法　　1.1沙眼衣原體菌株6MoPn生長于HeLa229細(xì)胞，用不連續(xù)密度梯度離心法純化衣原體，

6、進(jìn)行活性測定后用于感染小鼠?！　?.2感染小鼠6～8周齡雌性C57BL/6小鼠（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病研究所提供），在微麻狀態(tài)下鼻腔內(nèi)吸入40μl含1×103包涵體形成單位（IFU）的MoPn。　　1.3肺組織上清液中衣原體活性測定無菌采集小鼠肺組織右葉，制備成組織勻漿，離心。用肺組織上清液滴定HeLa細(xì)胞單層。用連接有過氧化物酶的鼠抗衣原體脂多糖單抗（anti-LPSmAb）（Virostat）染色，以鑒定衣原體的感染性，感染強(qiáng)度以IFU表示［1］?！　?.4肺組織髓過氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）檢測［2］制備

7、肺組織勻漿，沉淀物超聲粉碎。上清液與25μlTMB底物液反應(yīng)，以人髓過氧化物酶做標(biāo)準(zhǔn)品，在全自動酶標(biāo)儀上讀取650nmOD值?！　?.5MoPnmRNA的表達(dá)RT-PCR檢測小鼠肺組織沙眼衣原體MoPnmRNA表達(dá)。　　2結(jié)果　　2.1MoPn感染后小鼠肺組織衣原體生長6見圖1。圖1顯示，在感染后第2天，小鼠肺組織可檢測到衣原體生長，IFU值增高。衣原體生長在感染后第7天達(dá)高峰，4只小鼠肺組織均檢測到衣原體MoPnmRNA表達(dá)，見圖2?！　D1衣原體感染C57BL/6小鼠肺組織衣原體活性略　　圖2小鼠呼吸道沙眼衣原體感染后肺組織衣原

8、體MoPnmRNA表達(dá)略　　2.2中性粒細(xì)胞髓過氧化物酶（MPO）檢測C57BL/6小鼠呼吸道感染衣原體MoPn后第2天，肺組織MPO活性明顯增高（P<0.01），至第3天達(dá)高峰，以后逐漸下降，感染后21天恢復(fù)正常水平（圖未顯示