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《豬帶絳蟲熱休克蛋白90α基因的克隆表達及免疫學功能的初步研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、《中國圖書資料分類法》分類號：R383單位代碼：10660學號：S090030貴陽醫(yī)學院2012屆碩士學位論文豬帶絳蟲熱休克蛋白90α基因的克隆表達及免疫學功能的初步研究研究生：陳小睿導師：黃江教授年級：2009級專業(yè)：病原生物學2012年5月26日目錄摘要···························1前言···························3材料與方法·······················5結果···························16討論······················
2、·····23參考文獻·························26英文摘要·························28主要英文縮寫詞···················30致謝···························31學位論文獨創(chuàng)性聲明···············32附錄1,2·······················33綜述···························35貴陽醫(yī)學院2012屆碩士學位論文豬帶絳蟲熱休克蛋白90α基因的克隆表達及免疫學功能的初步研究專業(yè)：病原生物學碩士
3、研究生：陳小睿導師：黃江教授摘要：目的生物信息學分析和預測豬帶絳蟲熱休克蛋白90α(TaeniasolniumHeatshockprotein90alpha）基因及其編碼蛋白的結構和特性，原核克隆表達豬帶絳蟲熱休克蛋白90α基因(TsHSP90α),對重組TsHSP90α其免疫學功能進行初步研究。方法利用美國國家生物技術信息中心(NCBI,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和瑞士生物信息學研究所的蛋白分析專家系統(tǒng)（ExPASY,http://ca.expasy.org/）中有關基因和蛋白的序列和結構信息分析的各種
4、工具，結合其它生物信息學分析軟件包，如VectorNTIsuite,從豬帶絳蟲全長cDNA質粒文庫中識別TsHSP90α基因及其編碼區(qū)，分析、預測該基因編碼蛋白質的理化特性、翻譯后的修飾位點、功能域、亞細胞定位、拓撲結構、二級結構、三維空間構象等。將豬帶絳蟲成蟲HSP90α克隆到原核表達質粒pET-28a(+)中,在大腸埃希菌BL21/DE3中用IPTG誘導表達,表達產物通過十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進行鑒定,用鎳離子金屬螯合劑親和層析柱進行純化,純化的重組蛋白用蛋白印跡(WesternBlotting)進行
5、免疫學分析。結果該基因全長1079bp,編碼區(qū)為176bp－1054bp，編碼292個氨基酸，為全長基因；BLASTX發(fā)現(xiàn)該基因是熱休克蛋白90α的同源基因；PCR、雙酶切及DNA測序結果均表明pET-28a(+)-TsHSP90α重組質粒構建成功。SDS-PAGE結果表明目的基因在大腸埃希菌BL21/DE3中獲得高效表達,經親和層析獲得了高純度蛋白。重組蛋白可被其免疫的SD大鼠血清識別,表明其具有免疫原性；同時，重組蛋白能被豬帶絳蟲患者，亞洲帶絳蟲患者及牛帶絳蟲患者血清識別，表明重組蛋白具有免疫反應性。結論應用生物信息方法從豬帶絳蟲成
6、蟲cDNA文庫中篩選出了HSP90α基因，并對其所編碼蛋白的結構與功能進行預測。豬帶絳蟲成蟲熱休克蛋白90α基因可在大腸埃希菌BL21/DE3中獲得具有免疫活性的高效表達。western-blotting顯示重組蛋白具有免疫原性和免疫反應性。通過本研究1貴陽醫(yī)學院2012屆碩士學位論文為進一步闡明該蛋白在豬帶絳蟲生理代謝的作用機制奠定了基礎。同時對該蛋白免疫學功能的初步研究也為今后開展帶絳蟲病的應用型研究提供一定線索。關鍵詞：豬帶絳蟲；熱休克蛋白90α；結構與功能；生物信息學；基因克隆;原核表達；免疫功能學初步分析2貴陽醫(yī)學院2012屆
7、碩士學位論文前言豬帶絳蟲（TaeniasoliumLinnaeus,1758）、牛帶絳蟲（TaeniasaginaiaGoeze,1782）是寄生人體的主要帶絳蟲，近三十年來，在東南亞和西太平洋的許[1-4]多國家和地區(qū)發(fā)現(xiàn)的亞洲帶絳蟲（Taeniaasiatica）。其中豬帶絳蟲幼蟲又[5-8]會引起嚴重的囊蟲病。據(jù)2001－2004年我國人體重要寄生蟲病現(xiàn)狀的調查結果顯示，帶絳蟲感染率比1990年上升了52.47％，感染帶絳蟲人數(shù)約為55萬人；人囊蟲病的感染率也呈上升趨勢，感染人數(shù)約為110萬，并且主要分布在西部貧[9]困地區(qū)。這從
8、一個側面提示我們，流行區(qū)人群的飲食習慣并沒有完全改變、人[8]們的預防意識仍然不強。人是豬帶絳蟲唯一的終宿主，成蟲寄生于人的腸道，可引起消化不良、腹痛、腹瀉等消化道癥狀，豬帶絳蟲成蟲患者同時還是人囊蟲病和豬
