《ピペット當(dāng)番プロトコール》doc版

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1、羂膆蚈罿膅莂蚄羈芇芅薀羇羇蒀蒆羆聿芃螅羆膁葿蟻肅芄芁薇肄羃蕆蒃蝕肆芀荿蠆羋蒅螇蠆羈莈蚃蚈肀薃蕿蚇膂莆蒅蚆芄腿螄蚅羄莄蝕螄肆膇薆螃腿莃蒂螃袈膆蒈螂肁蒁螇螁膃芄蚃螀芅葿蕿蝿羅節(jié)蒅螈肇蒈莁袇膀芀蠆袇衿蒆薅袆肂艿薁裊膄薄蕆襖芆莇螆袃羆膀螞袂肈蒞薈羂膀膈蒄羈袀莄莀羀羂膆蚈罿膅莂蚄羈芇芅薀羇羇蒀蒆羆聿芃螅羆膁葿蟻肅芄芁薇肄羃蕆蒃蝕肆芀荿蠆羋蒅螇蠆羈莈蚃蚈肀薃蕿蚇膂莆蒅蚆芄腿螄蚅羄莄蝕螄肆膇薆螃腿莃蒂螃袈膆蒈螂肁蒁螇螁膃芄蚃螀芅葿蕿蝿羅節(jié)蒅螈肇蒈莁袇膀芀蠆袇衿蒆薅袆肂艿薁裊膄薄蕆襖芆莇螆袃羆膀螞袂肈蒞薈羂膀膈蒄羈袀莄莀羀羂膆蚈罿膅莂蚄羈芇芅薀羇羇蒀蒆羆聿芃螅羆膁葿蟻肅芄芁薇肄羃蕆蒃蝕

2、肆芀荿蠆羋蒅螇蠆羈莈蚃蚈肀薃蕿蚇膂莆蒅蚆芄腿螄蚅羄莄蝕螄肆膇薆螃腿莃蒂螃袈膆蒈螂肁蒁螇螁膃芄蚃螀芅葿蕿蝿羅節(jié)蒅螈肇蒈莁袇膀芀蠆袇衿蒆薅袆肂艿薁裊膄薄蕆襖芆莇螆袃羆膀螞袂肈蒞薈羂膀膈蒄羈袀莄莀羀羂膆蚈罿膅莂蚄羈芇芅薀羇羇蒀蒆羆聿芃螅羆膁葿蟻肅芄芁薇肄羃蕆蒃蝕肆芀荿ピペット當(dāng)番プロトコール改訂Ver1.02003.09　梶谷尚世毎日の仕事?朝、培養(yǎng)室の廃液を捨てて、ピュ－ラックスを入れてもとの場所に置く。?ピペットを乾熱滅菌器から培養(yǎng)室に運(yùn)ぶ(新しい缶が一番下になるように並べる)。?フィルター?シリンジの洗浄。?乾燥させたピペットを缶に詰めて、乾熱滅菌器にかける。(夕方)火

3、曜日?液體窒素補(bǔ)充日曜日?硫酸層のＬ-100希釈液、及びDWの入れ換え。?超音波洗浄層を洗浄し、L-100希釈液を満たす。?超音波裝置の橫にある洗浄槽の水を抜き、新しい水道水を入れ、L-100を約10ml加える。?2F及び3Fの試薬用の長いピペットの入っているピペットかごの回収、洗浄。?DWのプレフィルター洗浄。?サイフォンに水垢が付いていたら、洗浄（特に夏場が多い）。?3F実験室の超音波洗浄機(jī)の洗浄。?培養(yǎng)室のwaterbathの洗浄。Waterbathの水には少量のハイアミンを加える。＊ハイアミンを加えることにより雑菌が繁殖しにくくなる。＊ハイアミンの量が多すぎると

4、泡立ってしまうので注意。その他の仕事?フィルターは切らさないように作成する。?15mlチューブは溜まったら洗浄する。?培養(yǎng)試薬の作成。ピペットの卸し方?新しいピペットをプラスチックのピペットかごに入れる。＊決してステンレス製のピペットかごには入れない。?硫酸層の0.1%HClにovernightで浸す。?超音波洗浄。?液體窒素の分注について毎週火曜日Ｐ２実験室にある細(xì)胞ストック槽赤蓋（６つ、オレンジ蓋１つ）へ液體窒素補(bǔ)充を行う。液體窒素の量は各ストック槽內(nèi)の細(xì)胞が入った箱の上端以上となるようにする。また、液體窒素の量は直接観察するのは困難な為、Ｐ２にあるビーカー付き鉄棒

5、をつっこんで確認(rèn)する。注意點(diǎn)：入れるのが最後の方になるストック槽（特にオレンジ槽）では液體窒が不足になりやすいので、バランスよくみること。また、液體窒素をじかに浴びると危険なので気を付けること。作業(yè)を行う時(shí)はドアを開けて新鮮な空気が入るようにし、密室狀態(tài)で作業(yè)しないこと（気化窒素が溜まって呼吸が出來なくなることがある）。何か問題があった場合（特に液體窒素の不足に関して、また120L自動(dòng)供給裝置のemptysignalが出ているようであれば）は必ずすぐに責(zé)任者に報(bào)告すること。フィルターとシリンジの洗浄１、毎朝９時(shí)にバケツに入ったフィルターとシリンジを超音波洗浄機(jī)にかける。

6、①培養(yǎng)室に置いてあるフィルターとシリンジの入ったバケツを洗浄室に持って來る。洗浄用の長方形のかごにフィルターとシリンジを移して、洗浄槽に浸し、蓋をする。（この際、フィルターとシリンジが上下バラバラになっていることを確認(rèn)して洗浄すること）②超音波裝置のスイッチが洗浄槽の方に入っているか確認(rèn)（シールの色で確認(rèn)）して、十分間洗浄する。この間にバケツを軽くすすぎ、バケツの容量の約半分量水道水を入れ、L-100を約10ml加え、培養(yǎng)室の元の場所へ戻しておく。２、灌流する（６時(shí)間）。③洗浄槽からかごを取り出し、水を十分切ってから流しに持っていき、水道水で軽く洗う（表面の洗剤を取る程

7、度でよい）。④蓋付きの灌流用かごに移してピペットと同じように６時(shí)間灌流する（きちんと灌流できているか途中で確認(rèn)すること）。３、乾燥させる。⑤灌流後、水を良く切り、DWに浸ける。このとき、上部のフィルターとシリンジは浸らないので、上下逆さにしてもう一度浸す。⑥乾燥機(jī)にフィルターとシリンジの入ったかごを入れる。入れる際には、水切りを十分してから乾燥機(jī)に入れる（安定に早く乾燥させるためには必要）。目安としては２～３時(shí)間だが、完全に乾燥するまで乾燥機(jī)の中に入れておく。４、所定の位置に戻す。⑦完全に乾いていることを確認(rèn)してから、フィルターは大小區(qū)別