紫外分光光度法測(cè)定水中總酚的含量

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1、實(shí)驗(yàn)十紫外分光光度法測(cè)定水中總酚的含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．掌握紫外分光光度法測(cè)定酚的原理和方法。2．掌握應(yīng)用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行定量分析的方法和基本操作。二、實(shí)驗(yàn)原理苯酚是工業(yè)廢水中的一種有害物質(zhì)，如果流入江河，會(huì)使水質(zhì)受到污染，因此在檢測(cè)飲用水的衛(wèi)生質(zhì)量時(shí)，需對(duì)水中酚含量進(jìn)行測(cè)定。苯具有環(huán)狀共軛體系，由π→π*躍遷在紫外吸收光區(qū)產(chǎn)生三個(gè)特征吸收帶：強(qiáng)度較高的E1帶，出現(xiàn)在180nm左右；中等強(qiáng)度的E2帶，出現(xiàn)在204nm左右；強(qiáng)度較弱的B帶，出現(xiàn)在255nm。有機(jī)溶劑、苯環(huán)上的取代基及其取代位置都可能對(duì)

2、最大吸收峰的波長(zhǎng)、強(qiáng)度和形狀產(chǎn)生影響。具有苯環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物在紫外光區(qū)均有較強(qiáng)的特征吸收峰，在苯環(huán)上的部分取代基（助色團(tuán)）使吸收增強(qiáng)，而苯酚在270nm處有特征吸收峰，在一定范圍內(nèi)其吸收強(qiáng)度與苯酚的含量成正比，符合Lambert-Beer定律，因此，可用紫外分光光度法直接測(cè)定水中總酚的含量。三、儀器與試劑紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，石英比色皿（1cm）2個(gè)，50mL容量瓶，移液管等。苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液250mg·L-1：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.0250g苯酚于250mL燒杯，加20mL去離子水溶解，移入100mL容量瓶，用去離

3、子水定容至刻度，搖勻。四、實(shí)驗(yàn)步驟1．標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制取5只50mL容量瓶，分別加入2.00，4.00，6.00，8.00，10.00mL濃度為250mg·L-1的苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，用去離子水稀釋至刻度，搖勻。計(jì)算其濃度（mg·L-1）。2．吸收曲線的測(cè)定取上述標(biāo)準(zhǔn)系列中的任一溶液，用1cm石英比色皿，以溶劑空白（去離子水）作參比，在220～350nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)，掃描繪制吸收曲線。3．標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定選擇苯酚的最大吸收波長(zhǎng)（λmax），用1cm石英比色皿，以溶劑空白（去離子水）作參比，按濃度由低到高順序

4、依次測(cè)定苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度。4．水樣的測(cè)定在與上述測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的條件下，測(cè)定水樣的吸光度。五、數(shù)據(jù)記錄與處理1．以吸光度為縱坐標(biāo)，波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)繪制吸收曲線，找出最大吸收波長(zhǎng)λmax，并計(jì)算其εmax。2．以吸光度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后，根據(jù)水樣吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相對(duì)應(yīng)的濃度值，計(jì)算出水樣中苯酚的含量（g·L-1）。六、思考題1．紫外分光光度法與可見(jiàn)分光光度法有何異同？2．紫外分光光度計(jì)與可見(jiàn)分光光度計(jì)的儀器部件有什么不同？3．在用分光光度計(jì)進(jìn)行定量分析時(shí)，哪些操

5、作可能影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性？附：PELambda35紫外光譜儀使用操作指南1、開(kāi)機(jī)確認(rèn)儀器比色槽為空，打開(kāi)主機(jī)電源，預(yù)熱10min。開(kāi)啟電腦，進(jìn)入Win98系統(tǒng)，然后啟動(dòng)Lambda35控制軟件，進(jìn)入界面。2、掃描吸收曲線在“Methods”界面中選擇“Scan”選項(xiàng)卡，雙擊打開(kāi)“yh-00.MSC”方法文件。點(diǎn)擊工具欄上的“Start”按鈕，稍等，屏幕提示放入空白溶液。在外側(cè)比色槽中放入裝去離子水的比色皿，合上倉(cāng)蓋，點(diǎn)擊“確定”。稍等一會(huì)兒，屏幕提示放入樣品“V-01”，打開(kāi)倉(cāng)蓋，取出去離子水的比

6、色皿，放入另一裝有需進(jìn)行波長(zhǎng)掃描的樣品溶液比色皿，合上倉(cāng)蓋，點(diǎn)擊“確定”，即開(kāi)始波長(zhǎng)掃描。從Graph1窗口中可查看所得掃描曲線，找出最大吸收波長(zhǎng)。3、標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品溶液的測(cè)定回到“Methods”窗口，選擇“Conc”選項(xiàng)卡，從給出的方法文件中雙擊打開(kāi)“yh-00.MCO”文件，設(shè)置測(cè)定波長(zhǎng)，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度等參數(shù)。點(diǎn)擊工具欄上的“Start”按鈕，稍等，屏幕提示放入空白溶液?？瞻仔Ｕ?，按照提示，依次放入A01、A02、A03、A04、A05標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液進(jìn)行測(cè)定。從結(jié)果顯示窗口可讀取相應(yīng)的吸

7、光度數(shù)值，并可查看標(biāo)準(zhǔn)曲線。4、測(cè)量完畢，將容量瓶帶回實(shí)驗(yàn)室清洗干凈。