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1、操作規(guī)程出凝血25.1凝血因子抑制物定量實(shí)驗(yàn)（第四版）出凝血25.2原理：將受檢血漿與已知量的正常人某因子血漿混合，溫浴一定時(shí)間后測(cè)定剩余該因子的活性，以Bethesda單位來(lái)計(jì)算抑制物的含量，一個(gè)Bethesda單位相當(dāng)于滅活50%該因子的量。出凝血25.3標(biāo)本處理：患者處于休息狀態(tài)下，采空腹靜脈血（急診病人除外）。采血者應(yīng)技術(shù)熟練，“一針見(jiàn)血”，以防止組織損傷，使外源性凝血因子進(jìn)入標(biāo)本。最好不與其它實(shí)驗(yàn)一起采集而使血液停留在針管的時(shí)間延長(zhǎng)。采完血后，將血液沿管壁緩緩注入試管，避免產(chǎn)生氣泡；然后迅速將血液和抗凝劑輕
2、輕顛倒混勻，避免用力震蕩。全血要在1小時(shí)內(nèi)分離血漿。分離乏血小板血漿時(shí)，要在室溫下3000rpm離心10分鐘，室溫下可存放4小時(shí)。全部試驗(yàn)不能在4小時(shí)內(nèi)完成，應(yīng)將乏血小板血漿分裝在0.5～1.0ml的小試管中快速冷凍，儲(chǔ)存于-20℃冰箱中。冷凍過(guò)的標(biāo)本不能再次冷凍，否則結(jié)果會(huì)不準(zhǔn)確。冷凍血漿融化時(shí)，應(yīng)將盛冷凍血漿的容器置于37℃水浴中，并輕輕搖動(dòng)，使其迅速融化。出凝血25.4試劑：試劑購(gòu)于天津威士達(dá)公司1）APTT試劑：德靈Actin試劑（試劑盒代號(hào)527165）。每瓶試劑內(nèi)含磷脂（從兔腦中提取），1.0×104mo
3、l/L糅花酸，穩(wěn)定劑；共2ml。2）PT試劑：德靈ThromborelS4操作規(guī)程試劑,試劑盒代號(hào)OUHP29。試劑包括人腦凝血活酶凍干粉；氯化鈣和穩(wěn)定劑。每瓶試劑用蒸餾水4ml復(fù)溶。室溫平衡15min后上機(jī)分析。1）各種相應(yīng)的乏因子血漿（德靈）2）0.025mol/L氯化鈣3）0.05mol/L咪唑緩沖液（PH7.3）：咪唑0.34g，加氯化鈉0.585g，加蒸餾水100ml。從冰箱中取出后室溫平衡15min后上機(jī)分析。出凝血25.5儀器：Sysmex公司的CA-7000型全自動(dòng)血液凝固儀。HHS214型電熱恒溫水
4、浴鍋出凝血25.6操作：將多個(gè)正常人血漿混合，作為對(duì)照血漿。用咪唑緩沖液制備受檢者1/2、1/5、1/10、1/20、1/50的稀釋血漿（1份受檢血漿加n-1份緩沖液）。溫浴混合物的制備：1）對(duì)照：對(duì)照血漿0.2ml加緩沖液0.2ml2）受檢者：每種稀釋度血漿各取0.2ml，分別加對(duì)照血漿0.2ml3）將上述含混合物試管置37℃水浴2小時(shí)。用測(cè)因子的方法測(cè)定各管的因子水平。出凝血25.7計(jì)算1）剩余因子濃度（%）=（受檢者/對(duì)照）×100%4操作規(guī)程1）按下表將剩余的因子濃度換算成Bethesda單位。2）以Beth
5、esda單位計(jì)算因子抑制物含量。受檢血漿稀釋度×Bethesda單位=每毫升血漿中因子抑制物的Bethesda單位數(shù)。表：因子濃度與Bethesda單位的換算表剩余因子剩余因子剩余因子剩余因子剩余因子%單位%單位%單位%單位%單位970.05730.45550.85421.25321.65930.10700.50530.90411.30301.70900.15680.55510.95401.35291.75870.20660.60501.00381.40281.80840.25640.65481.05371.4527
6、1.85810.30610.70461.10351.50261.90780.35590.75451.15341.55252.00750.40570.80431.20331.60出凝血25.8舉例：對(duì)照溫浴后的因子濃度=52%受檢者1/5稀釋血漿與對(duì)照混合的因子濃度=35%剩余因子濃度=35/52×100%=67%從表中查得，67%剩余因子為0.575Bethesda單位稀釋度×單位數(shù)=因子抑制物單位值5×0.575=2.875Bethesdau/ml血漿出凝血25.9正常參考值：應(yīng)無(wú)抑制物，剩余因子濃度為100%；有
7、抑制物者，剩余因子濃度小于100%。出凝血25.10臨床意義：測(cè)定凝血因子VIII的抑制物僅限于血友病甲患者出現(xiàn)抗因子VIII抗體者，對(duì)其他原因所致抗因子VIII抗體者不甚敏感。4操作規(guī)程血循環(huán)中偶見(jiàn)存在抗因子X(jué)II、XI、IX、VII、V、II的抗體，在上述因子缺乏者應(yīng)用血或血液制品替代治療的患者，也偶見(jiàn)于免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥等。出凝血25.11參考文獻(xiàn)：1）主編王鴻利.止血與血栓檢驗(yàn)技術(shù).（第一版1992.6）上海科學(xué)技術(shù)出版社.2）主編李家增王鴻利韓忠朝.血液實(shí)驗(yàn)
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