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1、萬方數(shù)據(jù)StudyofDNAmethylationregulatingtransgeneexpressionintransgenicmiceThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomy1一一ZhouYang(CollegeofAnimalScienceandTechnology)Supervisor：Prof．PanQingjieQingdao．China萬方數(shù)
2、據(jù)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。如不實(shí)，本人負(fù)全部責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：鐘年f月估日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)學(xué)校可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有
3、關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：用砌簽字目期：沙J牛年5月諺FI導(dǎo)師簽字：簽字目期：枷仲年6月岱日、勿／，f．萬方數(shù)據(jù)青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要DNA甲基化調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因小鼠外源基因表達(dá)的研究摘要近年來，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物已被應(yīng)用于研宄基因功能，提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能，建立器官模型等方面。然而，成功獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物并不是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究的最終目的，通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)為人類的需求服務(wù)才是亟需解決的問題。在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中外源基因的遺傳和表達(dá)穩(wěn)定性已經(jīng)引起研究
4、者們的廣泛關(guān)注，并且仍然是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物遺傳育種邁向產(chǎn)業(yè)化的絆腳石。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)同一寓的純合轉(zhuǎn)基因小鼠的綠色熒光表型不同，Y-j了探討其潛在的分子機(jī)制，我們vXGAG啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)綠色熒光蛋白基因(Egfp)袁達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠為研究對(duì)象，以外源基因露印為研究目標(biāo)，通過實(shí)時(shí)熒光定量PeR，蛋白質(zhì)印跡和重亞硫酸鹽測(cè)序法檢測(cè)在不同綠色熒光表型的轉(zhuǎn)基因小鼠中各組織的外源基因?qū)徏颖磉_(dá)水平，DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)水平：GAG啟動(dòng)子區(qū)的DNA甲基化水平，Egfp基因編碼區(qū)的DNA甲基化水平以及對(duì)其表達(dá)水平和DNA甲基化水平之間建立相關(guān)性分析
5、。主要研究結(jié)果如下：1．在純合轉(zhuǎn)基因小鼠的各個(gè)組織中，外源基因?qū)張?chǎng)的表達(dá)水平各不相同，且差異顯著(P<0．05)。2．在綠色熒光袁型不同的純合轉(zhuǎn)基因小鼠的同種組織中，外源基因露碭在mRNA和蛋白水平的表達(dá)均不相同，且差異顯著(P<0．05)。3．通過建立外源基因露碭表達(dá)和OAG啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化之間的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，外源基因露巾表達(dá)受到GAG啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化的負(fù)調(diào)控作用(rI,2=一0．75，尸<0．01)；然而，建立外源基因Egfp表達(dá)和Egfp基因編碼區(qū)DNA甲基化之間的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，Egfp基因編碼區(qū)DNA甲基
6、化對(duì)外源基因Egrp的裹達(dá)沒有明顯的調(diào)控作用(r”=一O．41．P>0．05)。4．通過分別建立OAG啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶Dnm七1，Dnmt3a，Dnmt3b表達(dá)之間的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，僅Dnmt3b的表達(dá)與CAG啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化呈正相關(guān)關(guān)系(r：．。=0．80，P<0．01)。在本研究中，通過Dnmt3b相關(guān)的CAB啟動(dòng)子區(qū)DNA．旱基化抑制了外源基因的表達(dá)，并導(dǎo)致在同一窩后代中的純合轉(zhuǎn)基因小鼠的外源基因表達(dá)不穩(wěn)定。關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)基因小鼠：EGFP：CAG啟動(dòng)子區(qū)：Egfp基因編碼區(qū)；DNA甲基化萬方數(shù)據(jù)
7、童墨壅些查蘭壁蘭篁笙壟竺型——————————————————_——————_———’——————_—————————————————————●———————————————————————一一一一?！?一～StudyofDNAmethylationregulatingtransgeneexpressionintransgenicmiceAbstractTransgerdeanimalshavebeencreatedforstudyinggenefimction，improvinganimals’productiontrai
8、ts，providingorganmodelsforthestudyofhumandiseases．However,theultimateaimof拄ansgenesisisnottoproduceseveraltransgenicanimals，buttoserviceforthenee
