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《99tcm-egfr mrna反義肽核酸的制備及其在荷lewis肺癌c57bl6小鼠模型中的顯像研究》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文99Tcm--EGFRmRNA反義肽核酸的制備及其在荷Lewis肺癌C57BL/6小鼠模型中的顯像研究姓名:任秀春申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師:趙新明201203中文摘要99Tem.EGFRmRNA反義肽核酸的制備及其在荷Lewis肺癌C57BL/6小鼠模型中的顯像研究摘要目的:研究99TCm標(biāo)記表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)mRNA反義肽核酸(peptidenucleicacid,PNA)的制備方法,評價其標(biāo)記條件及體外穩(wěn)定性,并探討該分子探針在荷Lewis肺癌
2、C57BL/6小鼠體內(nèi)顯像的價值,研究反義基因顯像早期、特異性診斷惡性腫瘤的可行性,為核素基因反義顯像分子探針的制備及其早期診斷腫瘤提供實驗依據(jù)。方法:以EGFRmRNA第251-267位寡核苷酸片段即57.AGCAGCGATGCGACCCT.3’為靶序列,利用化學(xué)合成法人工合成EGFRmRNA反義PNA5’.AGGGTCGCATCGCTGCT.3’及無義PNA5’.AGTAGAGATGTGACGAT.3’。于反義/無義PNA5’端連接4個氨基酸(Gly.(D).Ala.Gly.Gly.)的短肽結(jié)構(gòu),形成一個類似N4結(jié)構(gòu)的強螯合基團(tuán),并引入1個丫.氨基丁酸(4.a(chǎn)
3、minobutyricacid,Aba)作為隔離物消除空間阻礙,形成結(jié)構(gòu)為Gly.(D)AIa.Gly.Gly.Aba.57.AGGGTCGCATCGCTGCP3’的化合物,利用配體交換法對反義PNA進(jìn)行99Tcm標(biāo)記。以相同的方法標(biāo)記無義PNA,利用高效液相色譜法(hi曲performanceliquidchromatography,HPLC)及快速薄層層析法(instantthin.1ayerchromatography,ITLC)測定標(biāo)記物的即刻標(biāo)記率,同時將標(biāo)記物室溫下放置4h、8h、12h以及24h后測定其體外穩(wěn)定性;并將兩種分子探針分別與人新鮮血清混合
4、后37℃條件下靜置24h,然后測定其在血清中的穩(wěn)定性。復(fù)蘇小鼠肺癌(Lewis)瘤株,接種于一只小鼠的右側(cè)腋窩皮下,待移植腫瘤生長直徑達(dá)2.0cm左右,處死荷瘤小鼠,將腫瘤組織切割成(3.4)mm3大小的組織塊,制備成單細(xì)胞懸液,注射于小鼠右側(cè)腋窩皮下,每只小鼠注射0.2ml,約4×106個細(xì)胞。定期觀察小鼠的生存狀態(tài)、飲食及腫瘤生長狀況,當(dāng)移植瘤體直徑約1cm時,選取腫瘤形態(tài)規(guī)則,色澤紅潤,大小無顯著性差異的荷瘤小鼠用于試驗。利用逆轉(zhuǎn)錄.聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscriptasePolymeraseChainReaction,RT-PCR)檢測Lew
5、is肺癌中文摘要腫瘤組織中EGFRmRNA的表達(dá)情況。取10只荷瘤小鼠,隨機平均分為反義顯像組和無義顯像組,分別經(jīng)尾靜脈注射標(biāo)記率較高的99Tcm-EGFRmRNA反義/無義PNAO.1ml(含37MBq),于注射后2h、6h、12h以及18h上機顯像,觀察兩組間荷瘤小鼠移植瘤放射性濃聚的差異。采用SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,所有計量資料結(jié)果均以x士S表示,兩組間計量資料行獨立樣本f檢驗,多組間計量資料采用單因素方差分析,以p<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:①經(jīng)HPLC分析,在理想的標(biāo)記條件下,99Tcm-EGFRmRNA反義PNA呈單峰,
6、保留時間約為3.1min。經(jīng)ITLC檢測,標(biāo)記物的即刻標(biāo)記率可達(dá)(95.64±2.48)%(n=5),室溫下靜置8h后標(biāo)記率大于90%;標(biāo)記物與新鮮血清孵育24h后標(biāo)記率均仍>82%。99TCm-EGFRmRNA反義PNA即刻標(biāo)記率高,無需純化,穩(wěn)定性較好,可直接用于動物體內(nèi)顯像實驗;@RT-PCR結(jié)果顯示:在相應(yīng)的位置可看到清晰的特異性條帶,說明Lewis肺癌腫瘤組織高表達(dá)EGFRmRNA;③注射反義探針后2h移植瘤顯影,腫瘤/對側(cè)肢體放射性比值,即靶與非靶比值(targettonontargetratios,咖比值)隨時間推移而增加,12h以后兩組T/NT比值
7、(反義組12h:6.05±0.18,18h:7.06±0.18;無義組12h:1.29±0.12,18h:1.02±0.05)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(12h:f=53.392,P<0.05;18h:戶76.657,P<0.05),其中18h時腫瘤顯像最清晰。在顯像早期,無義探針在移植瘤內(nèi)有輕度濃聚,在6h以后腫瘤的濃聚程度下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P
8、瘤體內(nèi),對