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《六味地黃丸聯(lián)合bfgf誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、學(xué)位論文六味地黃丸聯(lián)合bFGF誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化的研究StudyontheEffectofDifferentiationofRatBoneMarrowMesenchymalStemCelisintoNeuron-iikeCellsInducingbyLiuweiDihuangWanandBasicFibrolastGrowthFactorinvitro導(dǎo)教請(qǐng)學(xué)業(yè)文提文答姓名：級(jí)別：稱：時(shí)二O一二年五月師位名交辯指申專論論成都中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要JYllllIM25IIIHlH9Ill8llJlll5llllJl型目的：通過(guò)細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)，探討分離、培養(yǎng)、純化
2、和鑒定大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)的方法，觀察滋補(bǔ)肝腎中藥六味地黃丸聯(lián)合堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)體外誘導(dǎo)大鼠BMSCs分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的作用，探索獲得較高比例神經(jīng)元樣細(xì)胞的誘導(dǎo)方法。方法：采用全骨髓貼壁分離法分離、培養(yǎng)sD大鼠BMSCs，以純化的BMSCs為研究對(duì)象，觀察細(xì)胞形態(tài)變化、生長(zhǎng)增殖狀態(tài)，MTT法檢測(cè)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，對(duì)第3代細(xì)胞進(jìn)行表面標(biāo)志物CD44、CD34免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)，鑒定BMSCs。鑒定后，第3代細(xì)胞經(jīng)bFGF預(yù)誘導(dǎo)24小時(shí)后
3、按空白組、bFGF組、六味地黃丸組、bFGF+六味地黃丸組分別加入相應(yīng)誘導(dǎo)液進(jìn)行誘導(dǎo)，觀察細(xì)胞形態(tài)變化；誘導(dǎo)培養(yǎng)7天，采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)相關(guān)標(biāo)志物巢蛋白(Nestin)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的表達(dá)。結(jié)果：1．采用全骨髓貼壁分離法獲得原代BMSCs，隨多次換液棄懸浮細(xì)胞傳代棄其它貼壁細(xì)胞后得到純化的BMSCs。經(jīng)分離培養(yǎng)的第3代細(xì)胞增殖旺盛，具有較好的活力，利于誘導(dǎo)進(jìn)行。免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示CD44呈陽(yáng)性表達(dá)，CD34呈陰性表達(dá)。2．生長(zhǎng)良好的第3代BMSCs經(jīng)bFGF預(yù)誘導(dǎo)24小時(shí)后與空白組相比，細(xì)胞數(shù)量增多，立體感增強(qiáng)；各組BRSCs
4、分別以不同誘導(dǎo)液進(jìn)行誘導(dǎo)，2～3天細(xì)胞胞體收縮，形成圓形、不規(guī)整的錐形或三角形；4～5天，部分細(xì)胞逐漸伸出突起，多為2"---3極，呈現(xiàn)較典型的神經(jīng)元樣細(xì)胞形態(tài)；6---7天，神經(jīng)元樣細(xì)胞數(shù)量增多，bFGF+六味地黃丸組更為明顯?？瞻捉M細(xì)胞形態(tài)1---3天未出現(xiàn)明顯改變，但生長(zhǎng)速度明顯減慢，其后出現(xiàn)老化、死亡脫落。3．bFGF組、六昧地黃丸組和bFGF+六味地黃丸組均有Nestin、NSE、GFAP陽(yáng)性表達(dá)，bFGF+六味地黃丸組各指標(biāo)陽(yáng)性率高于bFGF組、六味地黃丸組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。1成都中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)論：1．經(jīng)全骨髓貼壁分離法分離、培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
5、能逐漸純化，細(xì)胞活性較高、生物學(xué)性狀穩(wěn)定，適于做進(jìn)一步研究。2．六味地黃丸能誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞定向分化，六味地黃丸和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子聯(lián)合誘導(dǎo)可獲得較高比例的神經(jīng)元樣細(xì)胞。關(guān)鍵詞：六味地黃丸堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)元樣細(xì)胞StudyontheEffectofDifferentiationofRatBoneMarrowMesenchymalStemCelisintoNeuron—likeCelisInducingbyLiuweiDihuangWanandBasicFibrolastGrowthFactorinvitroObjective：Abstrac
6、tThisstudyistoobservetheseparation，cultivationandpurificationofBMSCs，exploretheeffectofChinesemedicineLiuweidihuangwanwhichnourishingiiverandkidneyandbasicfibrolastgrowthfactor(bFGF)onthedifferentiationofratbonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)intoneuron一1ikecellsbycellbiologytechniques，wetrytofi
7、ndamethodtorevecieahigherproportionofneuron—likecelis．Methods：WeculturedtheflushingfluidofSprague—Dawleyratbonemarrow，purifiedBMSCsbyremovingtheunadherentcellstoobservechangesinmorphologyandproliferation．Detectionandid
