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1、河北大學碩士學位論文不同處理方式對中華絨螯蟹血淋巴Vg的影響姓名：張翔申請學位級別：碩士專業(yè)：水生生物學指導教師：康現(xiàn)江20070601摘要卵黃蛋白是甲殼動物胚胎和幼體生長發(fā)育所需的能量和營養(yǎng)源，因此它的合成、積累、多寡等對于胚胎和幼體來說是至關重要的。本文分離純化了中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)的卵黃蛋白，建立了間接競爭酶聯(lián)免疫吸附反應(ELISA)測定中華絨螯蟹卵黃蛋白的方法，并研究了切除眼柄及注射不同物質(zhì)對中華絨螯蟹血淋巴中卵黃蛋白原的影響，為深入闡明中華絨螯蟹卵黃發(fā)生及其調(diào)控機理提供基礎材料。利用聚丙烯酰胺凝膠電泳，采用不同的染色方法，從成熟中華絨螯蟹卵巢中鑒定出卵
2、黃蛋白，利用常規(guī)層析法(DEAE．Cellulose．52)對其進行了純化。采用常規(guī)免疫方法，以純化的卵黃蛋白作為抗原免疫家兔，制備了抗中華絨螯蟹卵黃蛋白的特異性多克隆抗血清。利用此抗血清，并結(jié)合免疫學方法對中華絨螯蟹雌性蛋白進行研究，研究發(fā)現(xiàn)：中華絨螯蟹的卵黃蛋白為雌性特異蛋白；卵黃蛋白與卵黃蛋白原有相似的免疫原性；中華絨螯蟹卵黃蛋白與日本沼蝦的卵黃蛋白間沒有免疫交叉反應。利用卵黃蛋白抗血清，建立了間接競爭酶聯(lián)免疫吸附反應(ELISA)測定中華絨螯蟹卵黃蛋白的方法，并確立了測定參數(shù)：抗血清與包被抗原的最佳工作濃度分別為1：10000和62．5ng／mL；最適檢測范圍為31．25--500n
3、g／mL，批內(nèi)變異系數(shù)為3．38％，批間變異系數(shù)為3．62％。采用ELISA法，對切除單、雙側(cè)眼柄及向已切除雙側(cè)眼柄河蟹體內(nèi)注射不同物質(zhì)對河蟹血淋巴中卵黃蛋白原濃度的變化進行了跟蹤測定。結(jié)果表明，向已切除雙側(cè)眼柄的河蟹體內(nèi)注射2只眼柄等量物，河蟹血淋巴中卵黃蛋白原的濃度在6h內(nèi)降至最低點；向已切除雙側(cè)眼柄的河蟹體內(nèi)注射已純化的性腺抑制激素(GIH)，河蟹血淋巴中卵黃蛋白原的濃度在9h內(nèi)升至最高點；而且我們的研究發(fā)現(xiàn)，切除雙側(cè)眼柄能夠明顯提高河蟹血淋巴中卵黃蛋白原的濃度。關鍵詞眼柄性腺抑制激素血淋巴中華絨螯蟹卵黃蛋白原AbstractYolkproteinsarethenutritiousso
4、ureeembryosandnauplii．Therefom，thesynthesis，inthedevelopmentalstageofcrustaceanstheaccumulationandthequantityofthemisverycrucialtotheembryosandnauplii．VitellinwaspurifiedfromovariesofmaturefemaleChillese加jtten．1姍dedcrab(Eriocheirsinensis)inthisresearch．Andallindirectcompetitiveerlzyme．1inkedimmunos
5、orbentassay(ELISA)fordetectingvitellincontentofE．sinensiswasestablished．ThispaperalsofocusedontheeffectstothefluctuationofhaemolymphvitellogeninlevelsinEsinensisduringovariandevelopmentinducedbyeyestalk。ablationandinjecfionofdifferentextracts．Thisstudyprovidedbasicdatainelucidatingthevitellogenesis
6、andregulationmechanism．WiththePAGE，stillapplyingvariousstainingmethods，ourstudyprovedoneformofvitellinint11em批ovaryofEsinensis．Accordingtothispaper,thevitellinwaspurifiedusingDEAE-Cellulose-52column．By印plyingtraditionalimmunitywayandtakingthepurifiedvitellinasantigentoinjectrabbit．thevitellin，sspec
7、ificantiserumwasobtained．Withthisspecificantiserumandapplyingimmunologymethod，thevitellinofEriocheirsinensiswasstudied·Theresultsshowed：thevitellinofE．sinensisWasthefemale—specificprotein；bothvitellinandvit
