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《低濃度鉛暴露對鯽魚肝臟抗氧化系統(tǒng)的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第21卷第5期環(huán)境化學(xué)Vol.21,No.52002年9月ENVIRONMENTALCHEMISTRYSeptember20021)低濃度鉛暴露對鯽魚肝臟抗氧化系統(tǒng)的影響2)陳亮郭紅巖沈紅王曉蓉(污染控制與資源化國家重點實驗室,南京大學(xué)環(huán)境學(xué)院,南京,210093)摘要研究了鯽魚幼體(Carassiusauratus)在低濃度鉛的長期(40d)暴露實驗中,鯽魚抗氧化系統(tǒng)所產(chǎn)生的生理生化反應(yīng).結(jié)果表明,在本實驗的劑量范圍內(nèi),鉛對鯽魚肝臟內(nèi)過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性(在
2、暴露濃度達到02mgl-1時)表現(xiàn)為誘導(dǎo)作用;而鉛對谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GST)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPx)的活性在低濃度時(001mgl-1)被抑制,其中暴露濃度在02mgl-1時GSHPx被進一步抑制.在實驗范圍內(nèi),GSH含量無明顯變化.另外,對于低濃度鉛的長期暴露,鯽魚肝臟中的GST和GSHPx較CAT和SOD敏感,可考慮作為水生生態(tài)系統(tǒng)中鉛低濃度長期暴露的一種生物檢測指標(biāo).關(guān)鍵詞:鉛,鯽魚,抗氧化系統(tǒng).環(huán)境中的無機鉛及其化合物十分穩(wěn)定,進入水體后,主要在水底沉積物中積累,并在適當(dāng)條件下從沉積物中緩慢持續(xù)地
3、向水體中釋放,造成對水生生態(tài)環(huán)境低濃度、長時間的污染.低濃度污染物對生物的危害短期內(nèi)很難觀察到,往往需要長期暴露后才能顯示出嚴(yán)重后果,因此,低劑量鉛長期暴露的生態(tài)效應(yīng)受到關(guān)注.生物體在分子水平上的改變可反映污染物對生物早期的作用,因而可作為靈敏的指標(biāo),用于檢測污染物對生物個體、種群的早期影響,從而達到保護生物及生態(tài)系統(tǒng)的目的.抗氧化防御系統(tǒng)作為一[1]類有前途的分子生態(tài)毒理指標(biāo),已逐漸引起國內(nèi)外學(xué)術(shù)界的重視.本實驗將幼齡鯽魚(Carassiusauratus)長期暴露在低濃度鉛溶液中,研究其對肝臟中抗氧化防御系統(tǒng)的過氧化氫酶(CAT)
4、、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GST)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPx)的活性以及還原型谷胱甘肽(GSH)含量的影響,探討上述指標(biāo)作為鉛污染早期預(yù)警的生物指示物的可能性.1材料與方法11暴露實驗以幼齡鯽魚為實驗生物(取自于南京市水產(chǎn)研究所祿口養(yǎng)殖基地,其平均體長為80cm左右,平均體重大約為120g),實驗前將鯽魚馴養(yǎng)10d,死亡率在5%以內(nèi).將鯽魚隨機放養(yǎng)在10L的玻璃缸內(nèi),每缸七條鯽魚,分別暴露于0,0005,0010,1)教育部博士點基金資助項目(編號200002824).2)通訊聯(lián)系人.
5、486環(huán)境化學(xué)21卷-12+0020,0050,0100,0200mgl的Pb溶液中.暴露實驗共進行40d,采用靜態(tài)置換法每天更新溶液50%,每天投碎屑狀餌料一次.暴露40d后,將鯽魚從玻璃缸中取出用自來水、蒸餾水沖洗,擦干后測量體長、稱重,然后迅速解剖.將魚的肝臟仔細地從脾和脂肪組織中分離出來,用生理鹽水漂洗,稱重后備用.-1取03g鯽魚肝臟于玻璃勻漿器內(nèi),加入3ml預(yù)冷的TrisHCl緩沖液(001mollTris,-1-1025moll蔗糖,01mmollEDTA,p
6、H75),冰浴下勻漿,上清液以10000g轉(zhuǎn)速冷凍離[2][6]心10min,上清液置于-80低溫冰箱保存.酶液中的蛋白質(zhì)用色素結(jié)合法測定.12活性測定[4]-1(1)GSH含量測定取50l勻漿液,25ml025moll磷酸緩沖液(pH=8),加入01ml1%鄰苯二甲醛的甲醇溶液混勻.1min后以343nm為激發(fā)光(Ex),在425nm處測熒光強度.[5](2)CAT活性測定在恒溫(2502)條件下,將酶樣加入到H2O2磷酸鹽緩沖液中,用紫外分光光度計(=250nm,10mm石英比色皿)測定H2O2在0
7、60s內(nèi)不同時刻的吸光度.[6]-1(3)SOD活性測定反應(yīng)溶液為9mlTrisHCl緩沖液(005moll,pH=82),-101mmoll鄰苯三酚和適量酶樣,反應(yīng)溫度為25,測定波長為325nm,鄰苯三酚的-1自氧化速率控制在007ODmin左右.酶活性單位定義為每毫升反應(yīng)液中,每分鐘抑制鄰苯三酚自氧化速率達50%的酶蛋白量.(4)GST活性測定用試劑盒(南京建成生物工程公司)測定GST的活性.GST具有催化還原型谷胱甘肽(GSH)與1氯24二硝基苯(CDNB底物)結(jié)合的能力,在一定反應(yīng)時間內(nèi),其活
8、性高低與反應(yīng)前后底物濃度的變化呈線形關(guān)系,本試驗通過檢測GSH濃度的高低來反映GST活性的大小.GST活性定義為每毫克蛋白質(zhì),每分鐘扣除非-1-1酶促反應(yīng),使GSH濃度降低1moll為一個酶活力單位(UmgPr).
