db35-t137.5-2001古田銀耳菌種制作規(guī)程

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1、DB35/T137.5—2001福建省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布2001-09-15實(shí)施2001-08-15發(fā)布古田銀耳標(biāo)準(zhǔn)綜合體菌種制作規(guī)程DB35/T137.5—2001DB35福建省地方標(biāo)準(zhǔn)ICS67.080.20B39備案號：1DB35/T137.5—2001前言本部分是古田銀耳標(biāo)準(zhǔn)綜合體中菌種制作規(guī)程，規(guī)定了菌種制作的術(shù)語和定義、基本設(shè)備、一級種制作、二級種培養(yǎng)、三級種培養(yǎng)、病蟲害防治、菌種質(zhì)量要求、檢驗(yàn)方法、標(biāo)志包裝保存運(yùn)輸。本標(biāo)準(zhǔn)由福建省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局、福建省農(nóng)業(yè)廳提出。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：古田縣質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局、古田縣食用菌辦公室。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：林祖壽、

2、蔡金波、張國雄、彭冬祥、徐彥彥、張漢文、戴維浩。IDB35/T137.5—2001古田銀耳標(biāo)準(zhǔn)綜合體菌種制作規(guī)程1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了古田銀耳標(biāo)準(zhǔn)綜合體菌種制作中的術(shù)語和定義、基本設(shè)備、一級種制作、二級種培養(yǎng)、三級種培養(yǎng)、病蟲害防治、菌種質(zhì)量要求、檢驗(yàn)方法、標(biāo)志包裝保存運(yùn)輸。本規(guī)程適用于古田銀耳菌種制作。2術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。2.1耳片銀耳子實(shí)體的瓣片。2.2耳基銀耳子實(shí)體基部，呈桔黃色或堊白色、硬實(shí)、蒂狀與培養(yǎng)基質(zhì)相聯(lián)結(jié)的部分。2.3交合將培養(yǎng)成熟的銀耳純菌絲與香灰菌絲按一定比例混合，培育有生產(chǎn)價(jià)值的銀耳菌種的方法。2.4基質(zhì)塊在銀耳子實(shí)體的耳基正

3、下方,由以銀耳純菌絲為主和少量香灰菌絲、培養(yǎng)基扭結(jié)而成的硬塊層。2.5基內(nèi)分離在生長子實(shí)體的培養(yǎng)基內(nèi)分離出菌種的專門技術(shù)。2.6分泌液銀耳菌種正常的生理活動(dòng)產(chǎn)生的無色、清黃或清紅色的分泌液。2.7吐黑水銀耳菌種被病原菌污染，或培養(yǎng)條件不適宜出現(xiàn)的異?，F(xiàn)象。2.8“楊梅霜病”（俗名）菌種受為害時(shí)，局部表面出現(xiàn)白色粉斑，周圍白毛團(tuán)生長受抑制或逐漸消溶。2.9“死菌”菌種受為害時(shí)，前期香灰菌絲可生長，中期香灰菌絲稀疏，菌絲前端出現(xiàn)粉紅色或褐色，后期香灰菌絲停止生長。3基本設(shè)備3.1原料倉庫面積等于或大于20m2，建在制種廠的西北向，要求干燥、通風(fēng)、環(huán)境衛(wèi)生、遠(yuǎn)離畜、禽舍

4、。3.2洗滌室面積等于或大于10m2，水泥地面，平整，有水源。室內(nèi)配備：臺(tái)秤，工業(yè)天平，50、100、500ml量杯，鐵鏟，水桶，鋁鍋，電爐，煤氣爐，小壓板，瓶刷，試管筐，試管（18×180mm），玻璃漏斗，漏斗架，紗布，棉塞，750ml菌種瓶。3.3滅菌室要求水泥地面，有水源。室內(nèi)配備：手提高壓蒸汽滅菌鍋，臥式高壓蒸汽滅菌鍋。3.4菌種培養(yǎng)室5DB35/T137.5—2001菌種培養(yǎng)室應(yīng)設(shè)2間。每間面積等于或大于15m2，要求干凈、通風(fēng)、保溫，水泥地面，平整。室內(nèi)配備：加溫設(shè)備、加濕設(shè)備、空調(diào)機(jī)、多層菌種架、溫濕度計(jì)、吸塵器、恒溫箱。4一級種制作4.1培養(yǎng)基制作

5、4.1.1瓊脂培養(yǎng)基制作采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA），即去皮馬鈴薯200g、瓊脂18g～20g、葡萄糖20g、水1000ml；pH自然。按常規(guī)方法，將培養(yǎng)基配制，裝入試管，滅菌制成試管斜面培養(yǎng)基。4.1.2木屑培養(yǎng)基制作木屑培養(yǎng)基配方：銀耳適生木屑71%、麩皮25%、蔗糖2%、石膏粉1.5%、硫酸鎂0.2%、磷酸二氫鉀0.3%；料水比，高溫季節(jié)1:1.3，低溫季節(jié)1:1.2。按常規(guī)方法，將培養(yǎng)基拌勻，裝瓶（瓶內(nèi)裝料7cm～8cm高），滅菌制成木屑培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的pH6～6.5，培養(yǎng)基的酸堿度不合要求，可按常規(guī)方法進(jìn)行調(diào)整。4.2一級種制作4.2.1純分離再

6、交合法4.2.1.1銀耳純菌絲分離4.2.1.1.1材料選擇子實(shí)體生長28d左右，朵大7cm～8cm，朵型圓正，生長健壯，耳片白且厚，無病害的銀耳菌袋。4.2.1.1.2取基質(zhì)塊切去銀耳子實(shí)體，挖出耳基正下方基質(zhì)塊，并切成2cm×2cm×2cm的方塊做分離材料。4.2.1.1.3基質(zhì)塊脫水將基質(zhì)塊用紗布包好，置于底層放有變色硅膠或五氧化二磷干燥劑的玻璃干燥器中強(qiáng)行脫水10～20d，或置于陰涼通風(fēng)處30d左右風(fēng)干。4.2.1.1.4分離培養(yǎng)在無菌箱內(nèi)，把基質(zhì)塊切開，在基質(zhì)塊的中、上層，鉤取1mm3的白色菌絲（含基質(zhì)），接種在瓊脂培養(yǎng)基上，每支試管接1至3粒。用同樣方

7、法接20支～30支試管，在24℃的室溫中培養(yǎng)8d～10d。4.2.1.1.5提純轉(zhuǎn)管選取生長健壯，圓正，豐滿的白毛團(tuán)，用接種針在白毛團(tuán)邊緣挑取1.5mm3帶培養(yǎng)基的銀耳純白菌絲，移接到已滅菌新的PDA試管斜面上，置于20℃～24℃下培養(yǎng)10d左右。4.2.2香灰菌絲分離4.2.2.1材料選擇子實(shí)體生長28d左右，朵大7cm～8cm，朵型圓正，香灰菌絲生長有力，培養(yǎng)料表面黑色素分布均勻，無病蟲害的菌袋。4.2.2.2從銀耳菌袋底部直接鉤取香灰菌絲0.5mm3，置于PDA試管斜面上培養(yǎng)。用同樣方法接20支～30支試管斜面，培養(yǎng)溫度24℃～26℃。4.2.2.3提純轉(zhuǎn)管

8、培養(yǎng)5～6