樹鼩呼腸孤病毒分離與核酸檢測方法建立及其致病性研究

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1、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩士研究生畢業(yè)論文學(xué)校代碼:10023學(xué)號:52011018001碩士學(xué)位論文樹嗣呼腸孤病毒分離與核酸檢測方法建立及其致病性研究IsolationofTupaiabelangeriOrthoreovirus,establishmentofnucleicaciddetectionmethodsandstudyonpathogenicityofthevirus所院:姓名:指導(dǎo)教師:導(dǎo)師小組:學(xué)科專業(yè):研究方向:完成日期:醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所李曉飛孫曉梅主任技師匡德宣副研究員陸彩霞助理

2、研究員動物學(xué)動物病毒學(xué)2014年5月~孫、o嘲p岬

3、。、、。中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩士研究生畢業(yè)論文目錄摘要???????????????????????????????????????????.1Abstact??????????????????????????????????????????..3前言????????????????????????????????5日U舌??????????????????????????????????????????..5第一部分樹駒呼腸孤病毒(TRV)分

4、離、R'I'-nPCR方法建立與初步應(yīng)用?????.121.實(shí)驗(yàn)材料?????????????????????????????.121.1實(shí)驗(yàn)動物?????????????????????????121.2細(xì)胞????????????????????????????????????121.3病毒???????????????????????????121.4主要試劑及耗材??????????????????????131.5主要儀器?????????????????????????.142實(shí)驗(yàn)方法???

5、??????????????????????????..142.1TRV的分離及電鏡觀察???????????????????142.2病毒RNA的提取?????????????????????.152.3TRV的PAGE電泳鑒定???????????????????162.4加入外源蛋白酶促進(jìn)TRV在Vero細(xì)胞的感染?????????162。5TRV的RT-nPCR檢測方法的建立??????????????..172.6TRv的RT-nPCR檢測方法的初步應(yīng)用????????????.213結(jié)果與分

6、析????????????????????????????..223.1患病樹駒臨床癥狀?????????????????????223.2TRV的細(xì)胞病變和電鏡形態(tài)?????????????????223.3TRV的PAGE電泳圖譜???????????????????223.4糜蛋白酶增強(qiáng)TRV對Vero細(xì)胞的感染????????????.233.5RT-nPCR產(chǎn)物的序列比對??????????????????233.6RT-nPCR的敏感性試驗(yàn)結(jié)果?????????????????243.7成年

7、樹嗣患病群TRV的檢測結(jié)果??????????????..253.8離乳樹鼢TRV的檢測結(jié)果?????????????????..263.9乳樹踟TRV的檢測結(jié)果??????????????????..264討{侖??????????????????????????????????????????274.1發(fā)病樹鼢與TRV的關(guān)系??????????????????..274.2TRv的基因組帶型特征分析?????????????????274.3TRV在Vero細(xì)胞中的感染???????????????

8、??..284.4建立TRVRT-nPCR檢測方法的意義?????????????.284.5樹嗣種群TRV的攜帶率???????????????????29第二部分樹銅呼腸孤病毒TaqMan熒光定量RT-PCR方法的建立及TRV2株致病性的研究????????????????????????????一311實(shí)驗(yàn)材料?????????????????????????????..311.1實(shí)驗(yàn)動物?????????????????????????311.2病毒???????????????????????

9、????311.3主要試劑及耗材??????????????????????311.4主要儀器?????????????????????????322實(shí)驗(yàn)方法??????????????????????????????32中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩士研究生畢業(yè)論文2.1樹踟呼腸孤病毒TaqMan熒光定量RT-PCR方法的建立?????.322.2TRV2株致病性的研究???????????????????一363結(jié)果與分析???????

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