樹鼩輪狀病毒分離及rt-pcr檢測方法建立

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1、中國圖書資料分類號：&(81-學校代碼：10679密級：學號：Y2012105092015屆碩士學位論文樹齣輪狀病毒分離及RT-PCR檢測方法建立IsolationandEstablishmentofaRT-PCRdetectionassayforTupaiarotavirus學院（所）：公共衛(wèi)生學院專業(yè):流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學研究方向：疾病預防與控制年級：2012級研究生：羅軍指導教師：宋志忠教授2015年6月5日聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和

2、致謝的地方外，論文中不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得大理學院或其他教育機構(gòu)的學位或證明而使用過的材料。對本文的研究做出貢獻的個人和集體，均己在文中以明確方式標明，并表示了謝意。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。研究生簽名：『日期」。吟，A-S"論文使用和授權(quán)說明本人完全了解大理學院有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交學位論文復印件和論文電子版：允許論文被查閱或借閱；學?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文；授權(quán)學

3、校將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索。(保密的論文在解密后應遵循此規(guī)定）、一X(Jc^nu研究生簽名：名導師簽名:日目錄中文摘要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1英文摘要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3前言．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

4、．．．．．．．6輪狀病毒流行病學概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8材料與方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14結(jié)果與分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19討論．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

5、．．．．．．31結(jié)論．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33參考文獻．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34論文綜述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36附錄．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

6、．．．．．．．．．．．．．．．．42致謝．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45-中文摘要樹鼩輪狀病毒分離及RT-PCR檢測方法建立研究生：羅軍導師：宋志忠指導老師：代解杰、孫曉梅目的：明確實驗樹鼩輪狀病毒的感染情況，建立樹鼩輪狀病毒快速、簡便的PCR檢測方法，為今后進行樹鼩輪狀病毒分子流行病學研究以及制定實驗樹鼩的國家質(zhì)量標準，規(guī)范和監(jiān)管質(zhì)量提供依據(jù)。為輪狀病毒感染機制的研究以及相關(guān)疫苗和藥物的研發(fā)提供有價值的數(shù)據(jù)資料。方法

7、：1.采集捕獲的野生樹鼩血清樣本及糞便樣本360份.2.通過ELISA方法以及膠體金法對樣品進行輪狀病毒攜帶的初步篩選。3.利用Triol法和體液病毒DNA/RNA小劑量試劑盒(AxyPrep)提取糞便樣品中的病原RNA.4.根據(jù)輪狀病毒基因9（G9），糖蛋白VP7基因的保守區(qū)域序列(GenBankM21843)設計合成RT-PCR引物，對樹鼩糞便的病原RNA進行RT-PCR擴增，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳得到所需的目的片段（365bp）。5.將目的片段利用純化試劑盒純化后做膠回收處理并送測序公司進行基因測序。6.將測序為陽性的

8、糞便樣品通過離心、過濾，接種到MA104細胞上進行擴增培養(yǎng)。7.提取細胞病毒液中的RNA分別做RT-PCR檢測方法的特異性和靈敏性實驗。結(jié)果：1.采集的360份糞便樣品和血清樣品通過膠體金和ELSA方法未檢測到樹鼩輪狀1-病毒陽性。2．通過RT-PCR方法檢測到一份陽性樣品，片段大小為365bp做膠回收并送測序公司測序，測序結(jié)果在