vegf、mir-205及其靶蛋白ezrin、lamina%2fc在卵巢癌中表達(dá)及意義

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1、原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明。作者簽名：粒日期．盟年上月生日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)說(shuō)明本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國(guó)家或湖南省有關(guān)部門(mén)規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)

2、科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。作者躲牲聊簽送嘿叢年上月立日VEGF、miR．205及其靶蛋白Ezrin、LaminA／C在卵巢癌中的表達(dá)及意義摘要：背景早期轉(zhuǎn)移是卵巢癌的惡性特征之一，但其轉(zhuǎn)移機(jī)制尚未明確。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)在卵巢癌患者血清以及癌組織中高表達(dá)，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移。本課題組前期對(duì)VEGF誘導(dǎo)上皮性卵巢癌細(xì)胞株HO．8910后進(jìn)行比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究，鑒定出17種差異蛋白，結(jié)合文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)其中兩種差異蛋白：Ezrin和Lam

3、inA／C與上皮性卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移高度相關(guān)，推測(cè)ⅦGF可能通過(guò)直接或間接調(diào)控二者，參與卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移。同時(shí)利用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)miR．205在Ezfin和Lamin～C的3'UTR均有結(jié)合位點(diǎn)。進(jìn)一步通過(guò)miRNA基因芯片檢測(cè)VEGF誘導(dǎo)后HO．8910的miRNA表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)其miR．205表達(dá)上調(diào)。由此推測(cè)，ⅦGF可能部分通過(guò)miR．205調(diào)節(jié)Ezfin和LaminA／C的表達(dá)實(shí)現(xiàn)調(diào)控卵巢癌侵襲和轉(zhuǎn)移。目的進(jìn)一步探討VEGF、miR-205及其靶蛋白Ezrin、Lamin～C在卵巢癌組織中的表達(dá)及意義。方法采用ELISA檢測(cè)上皮性卵巢癌及健康志愿者血清中VEGF的含量；采用免疫組

4、化檢測(cè)上皮性卵巢癌組織、卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1(vascularendothelialgrowthfactorreceptorl，VEGFR．1)、VEGFR-2、Ezrin、LaminA／C蛋白的表達(dá)情況和CD31所標(biāo)記的MVD(micro．vesseldensity)；采用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)VEGFR．1和VEGFR．2在四株細(xì)胞中的表達(dá)情況；采用熒光定量PCR方法檢測(cè)上皮性卵巢癌組織、卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織中miR-205、Ezrin和LaminA／C的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果(1)ELISA檢測(cè)VEGF在上皮性卵巢癌患者血清中的表達(dá)水平(10

5、1．48士19．44)高于在健康志愿者血清中的表達(dá)水平(30．69士3．13)，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；(2)免疫組化結(jié)果顯示：IIⅦGFR．1、VEGFR-2在上皮性卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為75．9％31191．4％，高于卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織中的陽(yáng)性表達(dá)率(P<0．05)，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；VEGFR．1和VEGFR-2在卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(胗O．05)；(3)免疫細(xì)胞化學(xué)顯示：VEGFR．1和VEGFR．2在四株卵巢癌細(xì)胞株中呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；(4)MVD在上皮性卵巢癌組織中的平均計(jì)數(shù)(7．56士O．508)高于在

6、正常卵巢組織中的平均計(jì)數(shù)(1．224-0．556)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；在上皮性卵巢癌組織中的平均計(jì)數(shù)(7．564-0．508)高于在卵巢良性腫瘤組織的MVD平均計(jì)數(shù)(0．74-0．389)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(氏0．05)。MVD在卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(胗0．05)；(5)Ezrin蛋白和LaminA／C蛋白在上皮性卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為51．7％和60．3％，低于卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織中的陽(yáng)性表達(dá)率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸<0．05)，但兩者分別在卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(胗0．05)

7、．(6)熒光定量PCR結(jié)果顯示：miR．205在上皮性卵巢癌中的相對(duì)表達(dá)量高于在正常卵巢組織中的相對(duì)表達(dá)量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義伊<0．05)；miR-205在上皮性卵巢癌組織中的相對(duì)表達(dá)量高于在卵巢良性腫瘤組織中的相對(duì)表達(dá)量，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(胗0．05)。Ezrin和LaminA／CmRNA在上皮性卵巢癌組織中的相對(duì)表達(dá)量低于在正常卵巢組織中的相對(duì)表達(dá)量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義儼<0．05)；Ezrin和LaminA／CmRNA在上皮性卵巢癌組織中的相對(duì)表