丙種球蛋白的制備

《丙種球蛋白的制備》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。

1、丙種球蛋白的電泳制備相關(guān)概念：【別名】免疫血清球蛋白，普通免疫球蛋白，人血丙種球蛋白，丙種球蛋白，靜脈注射用人免疫球蛋白。丙種球蛋白藥理作用：注射丙種球蛋白是一種被動免疫療法。它是把免疫球蛋白內(nèi)含有的大量抗體輸給受者，使之從低或無免疫狀態(tài)很快達(dá)到暫時免疫保護(hù)狀態(tài)。由于抗體與抗原相互作用起到直接中和毒素與殺死細(xì)菌和病毒。因此免疫球蛋白制品對預(yù)防細(xì)菌、病毒性感染有一定的作用。適應(yīng)癥：丙種球蛋白是血液中一種蛋白質(zhì)，它通常來源于許多人獻(xiàn)的血液。含有健康人群血清所具有的各種抗體，因而有增強機體抵抗力以預(yù)防感染的作用。主要用于免疫缺陷病以及傳染性肝炎、麻疹、水痘、腮腺炎、帶狀皰疹等病毒感染和

2、細(xì)菌感染的防治，也可用于哮喘、過敏性鼻炎、濕疹等內(nèi)源性過敏性疾病。電泳基本原理：電泳——帶電顆粒在電場的作用下，向著與其電性相反的電極移動，稱為電泳電泳技術(shù)——指利用電泳現(xiàn)象對混合物進(jìn)行分離分析的技術(shù)。其他電泳技術(shù)：1、紙電泳2、乙酸纖維素薄膜電泳3、凝膠電泳4、等電聚焦電泳5、等速電泳6、雙向凝膠電泳（二維電泳）盤狀電泳的原理：聚丙烯酰胺凝膠盤狀電泳是根據(jù)被分離物質(zhì)所帶的電荷多少及其分子的大小，形狀的不同，在電場的作用下，產(chǎn)生不同的速度而分離的方法。它是利用丙烯酰胺和雙丙烯酰胺在催化劑的作用下聚合成大分子的凝膠物。它同時兼有分子篩和電泳效應(yīng)。當(dāng)樣品通過凝膠進(jìn)行電泳時，便可以根據(jù)

3、其樣品中各分子的電荷和分子量的不同而泳動出不同的區(qū)帶。由于聚丙烯酰胺凝膠化學(xué)性質(zhì)較瓊脂穩(wěn)定，很少帶有側(cè)基，在電泳過程中，吸附作用與電滲作用均小，所以該技術(shù)的分辨率均高于其它瓊脂電泳技術(shù)盤狀電泳法的三個效應(yīng)：1、樣品濃縮效應(yīng)2、電荷效應(yīng)3、分子篩效應(yīng)在這三重效應(yīng)的共同作用下使血清蛋白中不同的蛋白質(zhì)分離開來。影響電泳速度的因素：電場強度、溶液的pH值、溶液的離子強度、電滲作用、粒子的遷移率、吸附作用。制備丙種球蛋白的方法丙種球蛋白的兩種分離制備的方法①層析法（如：SephadexG-50）定義:是一種利用混合物中諸組分在兩相間的分配原理以獲得分離的方法。②電泳法（如：聚丙烯酰胺凝膠電

4、泳)定義：利用溶液中帶有不同量的電荷的陽離子或陰離子，在外加電場中以不同的遷移速度向電極移動，而達(dá)到分離目的的分析方法。電泳儀的安裝：裝上貯槽和固定螺絲銷釘，仰放在桌面上。將長、短玻璃板分別插到凵形硅橡框的凹形槽中，注意勿用手接觸灌膠面的玻璃。將已插好玻璃板的凝膠模平放在上貯槽上，短玻璃板應(yīng)面對上貯槽。將下貯槽的銷孔對準(zhǔn)已裝好螺絲銷釘?shù)纳腺A槽，雙手以對角線的方式旋緊螺絲帽。豎直電泳槽，在長玻璃板下端與硅膠模框交界的縫隙內(nèi)加入已融化的1%瓊脂(糖)。其目的是封住空隙，凝固后的瓊脂(糖)中應(yīng)避免有氣泡。實驗器材：試劑：豬血清樣品、分離膠緩沖液、凝膠溶液、10%過硫酸銨（AP）、電極緩

5、沖液、固定液、染色液、脫色液儀器：圓盤電泳槽、電泳儀、電泳玻璃管、滴管、燒杯、刻度吸管、加樣槍、注射器等。實驗步驟：1.裝管取已準(zhǔn)備好的玻管，從一端量至7cm處，用筆劃線。起始端用膠布包封好后，插入橡皮塞中，垂直放好。2.配膠：分離膠的制備：（1）、將清潔、無破碎干燥的小玻管一端，用膠布貼封后，朝下垂直放入有機玻璃凝膠玻管架的孔中，并在小玻管的7.0cm處作一記號。（2）、用自動取液器吸取上述配好的分離凝膠貯液沿著小玻管內(nèi)壁小心準(zhǔn)確加入7.0cm高。（3）、凝膠溶液加完后，隨即吸取蒸餾水，加至管中的凝膠表面，使其表面覆蓋一水層（水封，1.0cm高）。在灌膠和封水的過程中，操作要輕

6、，以避免產(chǎn)生氣泡。（4）、將加注好的凝膠管于室溫下靜置，以進(jìn)行聚合反應(yīng)，在正常情況下大約30-60分鐘后，待界面出現(xiàn)明顯分層現(xiàn)象時，表明膠已聚合完畢，即可加濃縮膠濃縮膠的制備：（1）、輕輕倒掉分離膠玻管上端的液體，并用吸水紙吸去未倒凈的液體（但不能觸及膠面）然后先小心用濃縮膠貯液洗滌凝膠表面1-2次，再小心加入該濃縮膠貯液1.5cm高。（2）、隨后同樣加1.0cm高的蒸餾水層覆蓋膠表面。大約也在20-40分鐘后，待濃縮膠出現(xiàn)乳白色時，表明膠已聚合完畢。3.灌膠及封膠將混勻好的膠液，用滴管緩慢注入玻璃管，當(dāng)加到液面距離電泳玻璃管上口1cm時停止。注意在加的過程中不要混進(jìn)空氣，隨即用

7、注射器經(jīng)針頭沿凝膠管壁緩慢加入蒸餾水至管滿，防止氧化，室溫下聚合15-20min。4.制樣取血清30ul，加0.025%溴酚藍(lán)5ul，20%蔗糖65ul，混勻即可。5.加樣等膠完全凝結(jié)后，用濾紙小心吸去表面的水層（切勿破壞膠面的完整性）。將制好的膠管裝入電泳槽中調(diào)節(jié)高度并塞緊，然后分別在電泳槽的上下槽體內(nèi)注入電泳緩沖液，下槽的液面應(yīng)沒過玻璃管的下管口及電極絲，上槽的液面應(yīng)沒過玻璃管口0.5-1cm；排氣泡。用微量注射器或加樣槍吸取50μl樣品小心的加入玻璃管內(nèi)6、裝置凝膠管：將加