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《葉銹菌與tclr19小麥互作體系中2個(gè)病程相關(guān)蛋白基因的克隆及分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文葉銹菌與TcLr19小麥互作體系中2個(gè)病程相關(guān)蛋白基因的克隆及分析姓名：王珅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：王海燕；劉大群20120526摘要植物病程相關(guān)蛋白(Pathogenesis．relatedproteins，PRs)是指植物在病理或病理相關(guān)環(huán)境下誘導(dǎo)產(chǎn)生的一類蛋白，在多種植物中已有報(bào)道。為了深入研究小麥抗葉銹病機(jī)制，本研究利用RT-PCR和RACE技術(shù)，從被小麥葉銹菌誘導(dǎo)的抗葉銹病近等基因系材料TcLrl9中獲得病程相關(guān)蛋白1基因(TcLrl9PRl)和B．1，3．葡聚糖酶基因(勉rJ，9G脅)的cDNA全長(zhǎng)；并利用實(shí)時(shí)熒光
2、定量PCR技術(shù)對(duì)小麥與葉銹菌親和及非親和組合中TcLrl9PRl和TcLrl9Glu基因的表達(dá)模式進(jìn)行了分析；同時(shí)構(gòu)建了含有TcLrl9PRl、TcLrl9Glu基因的重組載體，通過(guò)基因槍介導(dǎo)法分別對(duì)小麥感病材料離體葉片和幼嫩胚性愈傷組織進(jìn)行了轉(zhuǎn)化。主要內(nèi)容包括以下幾個(gè)方面：1．以小麥抗葉銹病近等基因系TcLrl9和葉銹菌菌株07．10-421．3為材料，以接菌后各時(shí)間點(diǎn)的小麥葉片總RNA的等量混合物為模板，利用RT-PCR和RACE技術(shù)獲得TcLrl9PRJ和TcLrl9Glu的cDNA全長(zhǎng)。2．以接種葉銹菌的TcLrl9和Thatcher葉片為材料，應(yīng)用半定量PCR
3、和qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)親和與非親和組合中TcLrl9PRl和TcLrl9Glu的表達(dá)模式。結(jié)果表明，TcLrl9PRI在非親和組合中接種12h表達(dá)量達(dá)到最大，然后有所下降，但整體水平高于親和組合。TcLrl9Glu在非親和組合中12h表達(dá)水平開(kāi)始明顯上調(diào)，在36h表達(dá)量達(dá)到最大，但各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量均高于未接菌對(duì)照及親和組合。3．以TcLrl9小麥基因組DNA為模板，通過(guò)PCR技術(shù)獲得TcLrl9PRl的DNA序列。Southern雜交驗(yàn)證說(shuō)明TeLrl9PRl在小麥基因組中為低拷貝。并利用“中國(guó)春”缺體．四體系成功將該基因定位在小麥7D染色體上。4．為了研究B．1，3．
4、葡聚糖酶在小麥抗葉銹病中的作用，接種葉銹菌后檢測(cè)TcLrl9與Thatcher中葡聚糖酶活性。結(jié)果顯示，感病親本Thatcher接菌后O一144h之間葡聚糖酶活性緩慢升高，在144h達(dá)到最大，整體變化不明顯?？共〔牧蟃cLrl9接菌48h范圍內(nèi)p。l，3．葡聚糖酶活性水平明顯升高，48h達(dá)到高峰，整體表達(dá)水平比Thatcher高。5．將TcLrl9PRl和TcLrl9Glu基因分別定向插入到單子葉表達(dá)載體pAHC25中，獲得重組質(zhì)粒pAHC—TcLrl9PRl和pAHC．TcLrl9Glu。利用瞬間表達(dá)技術(shù)分析TcLrl9PRl和TcLrl9Glu基因與抗葉銹相關(guān)性，結(jié)
5、果顯示勉r』妒足J和尼LrJ9G覷基因的導(dǎo)入在一定程度上抑制葉銹菌菌絲的生長(zhǎng)。6．基因槍介導(dǎo)法將重組質(zhì)粒pAHC—TcLrl9PRl和pAHC．TcLrl9Glu轉(zhuǎn)化感病材料鄭州5389小麥的幼嫩胚性愈傷組織，經(jīng)分化篩選后獲得再生小麥植株。關(guān)鍵詞：小麥；病程相關(guān)蛋白；基因克隆；基因表達(dá)分析；瞬間表達(dá)；轉(zhuǎn)基因Cloningandanalysisoftwopathogenesis-relatedproteingenesfromTcLrl9inthedefenseresponsestoPucciniatrldclnaAuthor：WangShenMajor：PlantPath
6、ologySupervisors：AssociateprofessorWangHaiyanProfessorLiuDaqunAbstraetPlantpathogenesis—relatedproteins(PRs)aretheproteinsinducedbythepathogenorenvironmentconditionofpathologywhichhavebeenreportedaboutmanyplants．Theobjectiveofthisresearchwastodeeplyunderstandthemechanismofwheatresistance
7、toleafrustpathogen．RT—PCRandRACEwascombinedtoisolatethefulllengtheDNAsequenceof死L廠，9P尺1and尼Lrl9Glufromthenear-isogeniclineTcL訂9inducedbyPucciniatriticina．Quantitativereal-timePCR(qRT-PCR)WaSusedtodetecttheexpressionprofilesofTcLrl9PRlandTcLrl9Gluinthecompatibleandincompat
