拉莫三嗪通過(guò)誘導(dǎo)自噬降解bace1機(jī)制的研究

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1、碩士學(xué)位論文論文題目拉莫三嗪通過(guò)誘導(dǎo)自噬降解BACE1機(jī)制的研究研究生姓名吳昊指導(dǎo)教師姓名馬全紅專業(yè)名稱神經(jīng)生物學(xué)研究方向阿爾茨海默癥的病理機(jī)制研究論文提交日期2015年4月拉莫三嗪通過(guò)誘導(dǎo)自噬降解BACE1機(jī)制的研究中文摘要拉莫三嗪通過(guò)誘導(dǎo)自噬降解BACE1機(jī)制的研究中文摘要目的：研究拉莫三嗪促使BACE1降解的機(jī)制，為阿爾茨海默癥的臨床治療提供新的理論支持。方法：利用三個(gè)月大的APP/PS1小鼠，通過(guò)連續(xù)喂養(yǎng)五個(gè)月的拉莫三嗪后，把小鼠殺掉取出腦袋，把海馬和皮層分離開(kāi)來(lái)，分別提取組織蛋白后，檢測(cè)海馬和皮層中B

2、ACE1、AKT、CREB蛋白水平的變化；在HEK-BACE1-293和CHO細(xì)胞系以及海馬神經(jīng)元原代細(xì)胞上加入不同濃度的拉莫三嗪進(jìn)行藥物處理，檢測(cè)BACE1蛋白以及自噬相關(guān)蛋白AKT、mTOR、s6、CREB、LC3等蛋白水平的變化；在HEK-293細(xì)胞系上加入不同濃度的拉莫三嗪進(jìn)行藥物處理后，提取RNA，檢測(cè)BACE1以及自噬相關(guān)基因Atg7含量的變化；在CHO細(xì)胞系上轉(zhuǎn)染LC3-GFP質(zhì)粒，加入不同濃度的拉莫三嗪處理后，利用激光共聚焦顯微鏡觀察拉莫三嗪對(duì)自噬相關(guān)蛋白LC3形態(tài)變化的影響。結(jié)果：蛋白印跡實(shí)驗(yàn)

3、結(jié)果表明拉莫三嗪能夠使BACE1、p-mTOR以及p-s6的蛋白水平下調(diào)，p-AKT、p-CREB以及LC3II蛋白水平上調(diào)；PCR結(jié)果顯示，拉莫三嗪對(duì)BACE1的mRNA水平?jīng)]有影響，但是對(duì)自噬相關(guān)基因Atg7的mRNA水平具有上調(diào)作用；免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明拉莫三嗪能夠使LC3II點(diǎn)數(shù)增加。結(jié)論：我們通過(guò)本實(shí)驗(yàn)證明拉莫三嗪通過(guò)抑制mTOR信號(hào)通路來(lái)激活自噬來(lái)降低BACE1蛋白水平，為阿爾茨海默癥的臨床治療提供新的理論依據(jù)。關(guān)鍵詞：拉莫三嗪，BACE1，阿爾茨海默癥，自噬，mTOR。作者：吳昊指導(dǎo)教師：馬全紅I

4、LamotrigineReducesBACE1ProteinLevelsthroughInductionofAutophagyAbstractObjective:ToinvestigatethemechanismofdegradationofBACE1bylamotrigineandprovideanewtheoreticalsupportfortheclinicaltreatmentofAlzheimer'sdisease.Methods:ThreemonthsoldAPP/PS1micewerefedbyl

5、amotrigineafterfivemonths,weextractedthetissueproteinsbyseparatingthehippocampusandcortexinthebrainofmice,anddetectedthechangesoftheBACE1,AKT,andCREBproteinlevelsinthehippocampusandcortex;weusedlamotriginedrugontheHEK-BACE1-293,CHOcelllinesandneurons,testing

6、BACE1proteinandautophagy-relatedproteinAKT,mTOR,changes6,CREB,LC3andotherproteinlevels;inordertodetectthechangesofBACE1andautophagy-relatedgenesAtg7,weaddeddifferentconcentrationslamotrigineonHEK-293cellsline;theLC3-GFPplasmidwastransfectedtoCHOcelllines,the

7、nweaddedthevariousconcentrationsoflamotriginetoobservethemorphologicalchangesofautophagy-relatedproteinLC3byusinglaserconfocalmicroscopy.Results:ImmunoblotexperimentssuggestthatlamotriginecanmaketheBACE1,p-mTORaswellasp-S6proteinsleveldown,andup-regulatep-AK

8、T,p-CREBandLC3IIproteinlevel;PCRresultsshowed,lamotriginehadnoeffectonBACE1mRNAlevels,butthemRNAlevelofAtg7Autophagyrelatedgeneswasup-regulated;immunofluorescenceexperimentssuggestthatlamotrigin