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《葛根素誘導破骨細胞自噬的機制研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、葛根素誘導破骨細胞自噬的機制研究［摘要］目的觀察葛根素（Pur）對破骨細胞自噬的影響，探討其誘導破骨細胞自噬的機制。方法采用骨髓干細胞分化的方式培養(yǎng)原代破骨細胞，并按加入Pur量的不同，分成10、50、100ug/L的Pur組和空白對照組，采用免疫印跡技術(shù)（Western-Blot）檢測提取的自噬相關蛋白及Akt-mTOR通路相關蛋白的表迗。結(jié)果①10、50、100ug/L濃度的Pur組與空白對照組比較，其膜型與胞質(zhì)型微管相關蛋白1輕鏈3的比值（LC3II/I）均升高（P1.4蛋白質(zhì)印跡法（Western-blot）檢測相關蛋白的表迗采用Western-Blot檢測不同濃度Pur組和對照組LC
2、3II/I、p62、Akt、p-Akt和p-s6的蛋白表迗。提取各組細胞總蛋白，先用BCA（2,2-聯(lián)喹啉-4,4-二甲酸二鈉）法進行蛋白定量測定。加入上樣緩沖液，在95°C下變性10min。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）電泳，轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉封閉2h后，分別加入LC3、p62、Akt、p-Akt和p-s6單克隆抗體，在4°C環(huán)境下過夜，接著用TBST緩沖液洗膜3次，10min/次，加入二抗，在室溫下孵育2h，再次用TBST緩沖液洗膜。將得到的膜與電化學發(fā)光（ECL）試劑充分反應后，曝光于X線膠片上，顯影、定影、掃描后進行圖像分析。應用Image-ProPlus6.0軟件
3、對各個特異性條帶進行累計吸光度檢測，最后以積分吸光度值(IOD)來表不。1.5統(tǒng)計學方法采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)土標準差(x士s)表示，采用OneHVayANOVA檢驗，以P本實驗結(jié)果從分子水平上說明Pur有誘導破骨細胞自噬的作用，而Akt-mTOR信號通路可能是Pur誘導破骨細胞自噬變化的機制之一，但Akt-mTOR信號通路是否為其有效的主要通路，仍需后續(xù)實驗從不同角度驗證其作用，另外其他相關信號通路是否也參與此過程，還有待進一步研究。[參考文獻][1]王新祥，張允嶺，吳堅，等.葛根對睪丸切除骨質(zhì)疏松模型小鼠骨密度和骨構(gòu)造的作用[J].中國組織工程研究與臨床康
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