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《骨髓間充質(zhì)干細胞分化為心肌細胞與wntβ-catenin通路中β-catenin的關系》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、分類號學校代碼10542骨髓間充質(zhì)干細胞分化為心肌細胞與Wnt／p．catenin通路中p．catenin的關系Therelationshi。Pbetweendifferentiationofbonemarrowmesenchymalstemcellsintomyocardialcellsandthe13-cateninofWnt／[3--cateninPathway指導教師姓名、職稱笪堂坐圭堡匡埡湖南師范大學學位評定委員會辦公室二零一四年五月本課題獲得以下資助：湖南省自然基金13j5019目的摘要擴張型心肌
2、病(dilatedcardiomyoPathy，DCM)為死亡率較高的一種疾病，目前尚未報道其有效的治療措施。近些年研究的干細胞治療技術為它帶來了新的曙光。本研究試圖通過5-aza誘導骨髓間充質(zhì)干細胞分化1j擎為心肌細胞，并了解在該過程中Wnt／13．catenin信號通路是否參與分化過程的調(diào)控，旨在為臨床充分利用來源豐富的BMSCs(bonemarrowmesenchymalcells，BMSCs)移植治療終末期擴張型心肌病提供有效的實驗依據(jù)。方法：從2009左右的SD雄性大鼠股骨提取BMSCs，利用貼壁培
3、養(yǎng)方法，篷培養(yǎng)至P3代細胞后利用流式細胞儀(flowcytometry，F(xiàn)CM)來檢測細胞的表面抗原：主要選取CD29、CD34、CD45、CDl05等四種表面抗原進行檢測，從而達到鑒定骨髓間充質(zhì)干細胞的目的。臺盼藍染色計數(shù)細胞活性。選擇活性較好，純度較高的細胞制成細胞懸液，隨機均勻分成a組、b組、c組、d組，分別用O岬ol／L，5I_tmol／L，lOItmol／L，201．Lmol／L的5-aza進行干預，2周后比較總體細胞水平的活性率及心肌細胞的百分比，從而確定誘導分化的最佳濃度。此后將P3代骨髓間充質(zhì)
4、干細胞隨機分成2組，即實驗組及對照組。實驗組為A組需加入最佳誘導濃度的5-aza培養(yǎng)24h誘導分化，經(jīng)處理后更換為不含5-aza的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4周，根據(jù)培養(yǎng)時間的不同分成四組，即為培養(yǎng)第1周末、第2周末、第3周末、第4周末的各組細胞，分別對應為A1、A2、A3、A4四組。對照組B組不添加5-aza，參照A組的分組方法分別分為B1、B2、B3、B4四組；對各組細胞進行如下操作：①記錄不同時期細胞的生長狀態(tài)及形態(tài)；②行免疫熒光檢測心肌細胞中的特異性cTnT來鑒定心肌細胞，計數(shù)心肌細胞百分比；③采用蛋白印跡法(w
5、esternblot,WB)檢測各組cTnT及p-eatenin蛋白表達量，比較各組蛋白表達的變化。結果：應用FCM檢測顯示貼壁法培養(yǎng)獲取的P3代BMSCs高表達CD29、CDl05(分別為93．37％、89．08％)；而極少的表達CD34、CD45(分別為O．89％、1．06％)。經(jīng)臺盼蘭試驗測定其整體活細胞百分率>95％；通過對P3代BMSCs分別加入濃度為01xmol／L，519nol／L，109mol／L，209mol／L的5-aza進行干預的a組、b組、c組、d組，2周后細胞的活性率及心肌細胞的百分
6、率分別如下：①總細胞活性率：a組為94．2士7．4(％)，b組為93．6+7．1(％)，c組93．5+6．7(％)，d組80．1+9．2(％)，將各組數(shù)據(jù)行方差分析得出，a組、b組、C組各組細胞間總細胞活性率無明顯差異，但與d組比較，P0．05，無統(tǒng)Ⅱ計學意義。綜合分析得出：C組即經(jīng)109mol／L的5-aza處理
7、可將BMSCs誘導分化為心肌細胞，總細胞活性率較高。由BMSC分化而來的心肌細胞經(jīng)標記特異性cTnT蛋白的免疫熒光染色后，在顯微鏡下表現(xiàn)為染紅色熒光的細胞，各組心肌細胞百分比分別為：A1組及B組所有組別細胞顯鏡下未見心肌細胞形成，百分比為0(％)；A2心肌細胞百分率為3．33+1．53(％)；A3組心肌細胞百分比為19．67+1．53(％)，A4組為25．67士2．1(％)。將所得數(shù)據(jù)行方差分析得出A2、A3、A4各組間P40．05，有統(tǒng)計學差異。westernblot技術檢測cTnT的表達結果，A2組(1．
8、231+0．017)、A3組為(6．606+0．227)、A4為(8．511士0．392)明顯高于B1(O．824+0．012)、B2(0．826+0．138)、B3(O．827+0．02)、B4(0．827+0．004)，A1(0．819+0．062)，A組、B組行配對t檢驗后得出，A2與B2、A3與B3、A4與B4，P<0．05，有統(tǒng)計學意義，A1與B1，P>0．05，無明顯差異。A1、A2、A
