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《合浦珠母貝微衛(wèi)星dna標(biāo)記分離與遺傳多樣性研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、華中農(nóng)業(yè)人學(xué)2008屈碩'J：學(xué)位論文第1章文獻(xiàn)綜述1合浦珠母貝簡介及其研究現(xiàn)狀1．1合浦珠母貝簡介合浦珠母貝(Pinctadafucata)又稱馬氏珠母貝，隸屬于珍珠貝目(Pterioida)，珍珠貝科(Pteriidae)，珠母貝屬(Pinctada)，主要分布于我國廣東、廣西、海南、日本、印度以及澳大利亞沿海，是世界上用于生產(chǎn)海水珍珠的最主要貝類，所產(chǎn)珍珠即為歷史悠久、聞名遐邇的南珠。除產(chǎn)珠外，貝肉可鮮食，肉味極佳，珍珠是名貴裝飾品，貝殼可加工成珍珠粉，入藥治病，因此合浦珠母貝具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。1．2合浦珠母貝研究現(xiàn)狀1．2．1國內(nèi)研究現(xiàn)狀國內(nèi)以前關(guān)于合浦珠母貝的研究主
2、要集中在人工繁殖(張國范，1984；蒙釗美等，1996)、插核育珠(蒙釗美，1983)、幼貝攝食(黎輝等，1997)、遺傳育種(王愛民等，2003a)、精子生物學(xué)(喻達(dá)輝等，1998，1999a，1999b，1999c)、病害防治方面(姜衛(wèi)國，1984)。近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，也有很多學(xué)者開展了合浦珠母貝分子生物學(xué)方面的研究，喻達(dá)輝和朱嘉濠(2005)對中國、日本和澳大利亞合浦珠母貝的1TS2序列特征進(jìn)行了分析，結(jié)果表明3個地理種群內(nèi)和種群間的遺傳距離都較小，且相互重疊，從基因型數(shù)據(jù)看，3個群體既有各自獨(dú)立的基因型，也有共享基因型。但3個群體沒有各自獨(dú)有的突變位點(diǎn)，
3、說明3個地理種群既具有豐富的遺傳多樣性，又具有高度的遺傳一致性，即親緣關(guān)系很近。蘇天鳳等(2002)利用RAPD技術(shù)檢測了不同地理種群合浦珠母貝基因組DNA的多樣性，結(jié)果表明，廣西種群與廣東種群的親緣關(guān)系較近，而與海南種群親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。杜曉東等(2000)曾利用RAPD標(biāo)記對合浦珠母貝基因組DNA的多態(tài)性進(jìn)行了分析。王愛民等(2003b)運(yùn)用RAPD技術(shù)研究表明，合浦珠母貝不同地理種群間雜交能夠增加子代的遺傳多態(tài)性。YuandChu(2006)用AFLP技術(shù)研究了我國大亞灣、北部灣、三亞以及日本和澳大利亞5個不同地理種群的合浦珠母貝的遺傳差異，產(chǎn)生的多態(tài)性比較高(91．8．97
4、．3％)，群體間的遺傳分化較低(GsT：0．0079—0．0404)。凌立等(2006)對合浦珠母貝B一2肌動蛋白基因進(jìn)行了克隆和序列分析，通過RT．PCR方法克隆鑒定了合曲妮妮：合浦珠母兒微一衛(wèi)星DNA標(biāo)記分離oj遺傳多樣性研究浦珠母貝肌動蛋白同源基因片段，序列分析表明，該片段編碼的氨基酸序列與相應(yīng)同源片段具有較高的保守性。黃桂菊等(2007)進(jìn)行了合浦珠母貝熱休克蛋白hsp70基因的克隆與表達(dá)分析，獲得cDNA全長序歹lJ2365bp，同源性分析表明，合浦珠母貝hsp70的氨基酸序列與太平洋牡蠣(Crassostreagigas)等雙殼貝類的相似性高達(dá)86％以上。佟廣香等(
5、2007)用磁珠富集法進(jìn)行了馬氏珠母貝的微衛(wèi)星分離研究，得到8個多態(tài)位點(diǎn)。1．2．2國外研究現(xiàn)狀國外對于合浦珠母貝的研究較多的是日本。他們除了人工繁殖和插核育珠方面的研究外，還較早的開展了人工選育方面的研究(wadaandKomaru，1990，1994a，1994b)。在微衛(wèi)星分離及遺傳多樣性方面，Evansetal(2006)進(jìn)行了大珠母貝基因組微衛(wèi)星分離研究，得到6個多態(tài)標(biāo)記；Herbingeretal(2006)進(jìn)行了珠母貝的基因組微衛(wèi)星分離研究，得到10個多態(tài)標(biāo)記。2微衛(wèi)星分子標(biāo)記的分離方法自1989年微衛(wèi)星標(biāo)記報(bào)道以來(LittandLuty，1989；Tautz，
6、1989；WeberandMay，1989)，由于其高度多態(tài)性和共顯性特點(diǎn)，得到廣泛應(yīng)用，其分離技術(shù)也得到不斷的改進(jìn)，常見的分離方法有以下幾種。2．1小片段DNA克隆法小片段DNA克隆法(smallDNAfragmentscloning)的基本原理是構(gòu)建目標(biāo)生物基因組小片段DNA文庫，通過雜交篩選出含有微衛(wèi)星序列的陽性克隆。首先用限制性內(nèi)切酶充分消化DNA，瓊脂糖凝膠電泳，選取400—900bp片段克隆，構(gòu)建基因組文庫。然后將重組克隆轉(zhuǎn)移到雜交膜上，采用P32標(biāo)記的重復(fù)序列探針如(AT)。進(jìn)行雜交，放射自顯影，獲得陽性克隆、測序，設(shè)計(jì)PCR弓]物并進(jìn)行擴(kuò)增篩選。魯翠云等(200
7、5)利用上述方法從鳙魚文庫中篩選6000個菌落，獲得陽性克隆99個，75個含有微衛(wèi)星序列。2．2富集文庫法2．2．1引物延伸富集法引物延伸富集法就是將酶切后的DNA選擇片段重組入噬菌體載體中，建立單鏈DNA文庫，然后以單鏈DNA為模板，含微衛(wèi)星序列的寡核苷酸為PCRiJJ物，進(jìn)行引2華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2008屆碩L學(xué)位論文物伸長反應(yīng)，獲得富含目標(biāo)微衛(wèi)星的雙鏈產(chǎn)物。利用此方法，SekinoandSara(2001a，2003)相繼分離了日本盤鮑(Haliotisdiscusdiscus)和太平洋牡蠣
