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1、學校代碼：10264研究生學號：M090101112上海海洋大學碩士學位論文合浦珠母貝微衛(wèi)星標記的分離篩選及題目：F2代家系的遺傳多樣性分析IsolationandscreeningofnewmicrosatelliteDNAmarkersandgeneticdiversityanalysis英文題目：onafamilialF2populationofthepearloysterPinctadafucata專業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖研究領(lǐng)域：遺傳育種姓名：油九菊指導教師：喻達輝研究員上海海洋大學，上海，20
2、1306中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所，廣州，510300二O一二年六月IsolationandscreeningofnewmicrosatelliteDNAmarkersandgeneticdiversityanalysisonafamilialF2populationofthePearlOysterPinctadafucataADissertationSubmittedByJiujuYouForTheDegreeofMasterofAgronomySupervisor:ProfessorD
3、ahuiYuSpeciality:AquacultureShanghaiOceanUniversity,Shanghai201306,P.R.ChinaSouthChinaSeaFisheriesResearchInstitute,CAFSGuangzhou510300,P.R.ChinaJune,2012上海海洋大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學術(shù)道德，崇尚嚴謹學風。所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任
4、何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內(nèi)容負責，并完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學學位論文版權(quán)使用授權(quán)書學位論文作者完全了解學校有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海水產(chǎn)大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學位論文。保密□，在年解密后適用本版權(quán)書。本學
5、位論文屬于不保密□學位論文作者簽名：指導教師簽名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大學碩士學位論文合浦珠母貝微衛(wèi)星標記的分離篩選及F2代家系的遺傳多樣性分析摘要合浦珠母貝（Pinctadafucata）是我國海水珍珠養(yǎng)殖的重要育珠貝，在我國海水珍珠產(chǎn)業(yè)中占有重要的位置。本研究利用FIASCO法進行了新的微衛(wèi)星序列篩選，同時對實驗室以前設(shè)計的微衛(wèi)星引物、根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫的EST序列設(shè)計的引物以及文獻發(fā)表的引物進行了篩選，然后利用篩選的有效引物對大亞灣隨機群體和F2家系進行了遺傳變異分析，主
6、要結(jié)構(gòu)如下：1.微衛(wèi)星引物篩選。（1）采用生物素標記的(AC)15探針和磁珠富集法構(gòu)建合浦珠母貝基因組DNA微衛(wèi)星富集文庫。隨機挑選2097個克隆進行篩選，得到483個候選克?。?3.03%），對其中135個陽性克隆測序分析發(fā)現(xiàn)122個克隆含有微衛(wèi)星重復(fù)單元（90.37%）。進一步通過序列比對，獲得65個具有特異微衛(wèi)星序列的陽性克?。?3.28%），其中包含85個微衛(wèi)星DNA結(jié)構(gòu)域，其完美型（perfect）、非完美型（imperfect）和混合型（compound）分別占82.36%、8.24
7、%和9.41%，重復(fù)次數(shù)主要分布于5~20之間（95.74%），平均重復(fù)次數(shù)為7.83，(AC/GT)n重復(fù)所占比例最高（75.53%）。利用PrimerPremier5.0設(shè)計了65對微衛(wèi)星引物，通過三亞養(yǎng)殖群體篩選，共獲得20個新的可穩(wěn)定擴增的位點，其中14個具多態(tài)性；20個新位點經(jīng)F2代家系篩選，19對穩(wěn)定擴增；（2）對本實驗室以前發(fā)表的多態(tài)引物進行F2代家系篩選，共獲得4個可穩(wěn)定擴增的位點；（3）對本實驗室設(shè)計的微衛(wèi)星引物進行F2代家系篩選，共獲得35個可以穩(wěn)定擴增的位點；（4）對文獻中
8、已發(fā)表引物進行F2代家系篩選，共獲得36個可以穩(wěn)定擴增的位點；（5）對GeneBank中合浦珠母貝EST序列設(shè)計18對微衛(wèi)星引物，并進行F2代家系篩選，共獲得11對新的可穩(wěn)定擴增的位點。共獲得105個有效擴增位點。這些位點可用于合浦珠母貝群體及家系的遺傳多樣性分析和遺傳圖譜構(gòu)建等研究。2.大亞灣群體的遺傳多樣性分析。利用上述20個位點中的5個對大亞灣隨機種群進行了遺傳多樣性分析，共檢測到29個等位基因，片段長度范圍為122~402bp。各位點等位基因數(shù)2~9個，平均等位基因數(shù)(A)5.8個；有效
