化學(xué)小分子調(diào)控雌激素生物合成的研究

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1、ClassifiedIndex：U．D．C：SouthwestUniversityofScienceandTechnoll'938clenceaneclanologyMasterDegreeThesisRegulationofEstrogenBiosynthesisbySmallChemicalMolecularGrade：2011Candidate：YuanYunAcademicDegreeAppliedfor：MasterSpeciality：AppliedChemistrySupervisor：YuanXiaohongMar．12

2、，2014獨(dú)創(chuàng)性聲明IUMIIIIIIlUUlIIILIIIIIlUlIIIIIIIY2585753本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得西南科技大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。簽名：李湯念日期：扣f咿-6J關(guān)于論文使用和授權(quán)的說明本人完全了解西南科技大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論

3、文的復(fù)印件，允許該論文被查閱和借閱；學(xué)校可以公布該論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)簽輒銣?喀日期：l；D7夠∥∥西南科技大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文第1頁摘要乳腺癌是患病率最高的女性惡性腫瘤之一，乳腺組織局部雌激素含量過高是導(dǎo)致乳腺癌的主要原因。此外，機(jī)體內(nèi)雌激素合成紊亂也會(huì)導(dǎo)致骨質(zhì)疏松、肥胖、冠心病等多種常見疾病。雌激素結(jié)合激活雌激素受體(ERa／p)，分別通過其介導(dǎo)的基因組以及非基因組信號(hào)通路發(fā)揮其生理功能。芳香化酶是體內(nèi)催化雌激素生物合的限速酶，它以雄激素為底物催化合

4、成雌激素。通過降低芳香化酶表達(dá)量進(jìn)而有效降低雌激素的生物合成是實(shí)現(xiàn)組織選擇性調(diào)控雌激素合成的主要手段，但是目前尚缺乏相關(guān)的化學(xué)小分子手段。我們通過前期本課題組建立的雌激素篩選模型，篩選諸多不同結(jié)構(gòu)化學(xué)小分子的雌激素合成活性，闡明其調(diào)控雌激素生物合成的機(jī)制，為治療雌激素相關(guān)疾病的藥物研發(fā)提供依據(jù)。本論文主要包含三部分。1．兩個(gè)天然產(chǎn)物活性小分子(植醇、(22E)．麥角甾．6,9，22三烯．3∥，5a，8a．三醇)調(diào)控雌激素生物合成活性及其機(jī)制的研究：利用基于人卵巢顆粒樣KGN細(xì)胞的雌激素生物合成篩選模型，對(duì)從慈竹(Sinocalamusa

5、ffinis)和粗狀潤(rùn)楠(Machilusrobusta)中獲得的63個(gè)化合物進(jìn)行活性篩選，得到兩個(gè)具有組織特異性的抑制芳香化酶轉(zhuǎn)錄的活性小分子(植醇、(22E)．麥角甾一6,9，22三烯．3∥，5僅，8。[．三醇)。作用機(jī)制研究表明，它們通過抑制芳香化酶啟動(dòng)子1．3／II的活性來降低細(xì)胞內(nèi)芳香化酶mRNA及蛋白的表達(dá)，但不影響芳香化酶的活性。通過westernblot檢測(cè)到它們能夠降低p38和CREB的磷酸化，且p38MAPK抑制劑SB203580能夠降低細(xì)胞內(nèi)芳香化酶mRNA的量及芳香化酶的活性，暗示化合物通過影響p38MAPK介導(dǎo)

6、的CREB途徑來調(diào)控啟動(dòng)子1．3／II的活性，從而調(diào)控芳香化酶的表達(dá)。2．2．芳基苯并呋喃類化合物調(diào)控雌激素生物合成活性的研究：利用基于磁微粒分離酶聯(lián)免疫法的雌激素生物合成篩選模型，對(duì)合成的53個(gè)2．芳基苯并呋喃類化合物進(jìn)行雌激素生物合成活性進(jìn)行評(píng)價(jià)和構(gòu)效關(guān)系分析。結(jié)果表明，結(jié)構(gòu)中的寡糖鏈對(duì)化合物的促雌激素生物合成活性具有重要的作用。3．細(xì)胞膜結(jié)合的雌激素受體的特異性標(biāo)記研究：細(xì)胞膜結(jié)合的雌激素受體(cellmembrane．boundestrogenreceptor,cmER)介導(dǎo)了雌激素的非基因組作用，但是其作用機(jī)制受限于能夠有效區(qū)

7、分細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜雌激素受體的標(biāo)記方法。通過對(duì)含有三個(gè)不同的特異性短肽A1，S6和ybbR的谷胱甘肽S轉(zhuǎn)西南科技大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文第Ⅱ頁移酶融合蛋白分別進(jìn)行體外表達(dá)，比較兩個(gè)磷酸泛酰巰基乙胺基轉(zhuǎn)移酶(Phosphopantetheinyltransferase)．AcpS和Sfp對(duì)三個(gè)融合蛋白的識(shí)別選擇性。我們選取識(shí)別效率較高和特異性較好的A1短肽，將其構(gòu)建到雌激素受體ERa的C端(ERa．A1)，結(jié)果表明該偶聯(lián)并不影響ERa的蛋白質(zhì)表達(dá)及其在雌激素作用下的轉(zhuǎn)錄，來源于大腸桿菌的PPTase．AcpS可以以輔酶A一生物素(Coenzy

8、meA．biotin)為底物，將生物素特異性標(biāo)記到細(xì)胞膜結(jié)合的ERa．A1。關(guān)鍵詞：乳腺癌；雌激素；芳香化酶；雌激素受體；標(biāo)記：輔酶A西南科技大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文第ⅡI頁AbstractBreastcan