兔傳代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的篩選及其成骨能力的研究

兔傳代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的篩選及其成骨能力的研究

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1、分類號(hào)R683.4學(xué)校代碼10601密級(jí)公開編號(hào)Y1002107碩士學(xué)位論文兔傳代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的篩選及其成骨能力的研究學(xué)科專業(yè):外科學(xué)研究方向:骨組織工程研究生姓名:茹嘉學(xué)號(hào):1002107學(xué)位類型:科學(xué)學(xué)位導(dǎo)師姓名:李強(qiáng)教授二O一三年四月獨(dú)創(chuàng)聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含未獲得(注:如沒有其他需要特別聲明的,本欄可空)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明

2、確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名:簽字日期:年月日----------------------------------------------------------------學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解桂林醫(yī)學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤,允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)桂林醫(yī)學(xué)院可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論

3、文全文數(shù)據(jù)庫》、《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》,并通過網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名:導(dǎo)師簽字:簽字日期:年月日簽字日期:年月日目錄兔傳代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的篩選及其成骨能力的研究....………......5中文摘要…………………………...…………………………………5ABSTRACT……………………………………………………………7英漢縮略對(duì)照…………………………………………………………10前言……………………………………………………………………151材料與方法……………………………………………………151.1實(shí)驗(yàn)材料及

4、實(shí)驗(yàn)試劑……………………………………………151.2實(shí)驗(yàn)方法…………………………………………………………152結(jié)果…………………………………………………………………232.1原代細(xì)胞觀察……………………………………………………232.2傳代細(xì)胞觀察……………………………………………………232.3組織學(xué)染色CD44免疫學(xué)染色……….…………………….….…..232.4CD44免疫學(xué)染色………………….….…………………….….…..232.4MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖周期…………………………………………...242.5流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期……………………………………….

5、..242.6倒置顯微鏡觀察誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)………………………………...242.7Ⅰ型膠原免疫組化染色…………………………………………….242.8堿性磷酸酶酶標(biāo)法檢測(cè)…………………………………………...242.9鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色………………………………………………...253討論………………………………………………………………263.1BMSCs的分離與純化方法……………………………………273.2BMSCs體外培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)觀察…………………………………...293.3BMSCs細(xì)胞增殖…………………………………………………...303.5流式細(xì)胞儀檢測(cè)BMSC

6、s細(xì)胞周期……………………………….3133.6BMSCs向成骨細(xì)胞分化…………………………………………...334結(jié)論…………………………………………………………36參考文獻(xiàn)…………………………………………….……….37附圖……………………………………………………………………..42綜述…………………………………………………………………….46攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄………………………………….61致謝…………………………………………………………………….624兔傳代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的篩選及其成骨能力的研究中文摘要目的:1.本研究從兔骨髓液中分離骨髓間充質(zhì)

7、干細(xì)胞(BMSCs),進(jìn)行體外培養(yǎng),旨在建立一套行之有效的體外分離,培養(yǎng)BMSCs的方法。2.通過各代觀察BMSCs的形態(tài),檢測(cè)不同代BMSCs的細(xì)胞增殖周期和細(xì)胞生長(zhǎng)周期,從而了解各代BMSCs的生物學(xué)性狀以及初步確定作為理想的組織工程種子細(xì)胞的理想代數(shù)。3.BMSCs在成骨誘導(dǎo)液的誘導(dǎo)下向成骨細(xì)胞特定分化,通過檢測(cè)成骨細(xì)胞特有指標(biāo)Ⅰ型膠原,堿性磷酸酶和鈣結(jié)節(jié)的表達(dá),了解BMSCs向成骨細(xì)胞方向分化的能力。方法:1.利用骨穿針在兔股骨抽取骨髓液,利用密度梯度離心法聯(lián)合貼壁細(xì)胞篩選法對(duì)BMSCs進(jìn)行體外培養(yǎng),觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。2.觀察各代細(xì)胞形態(tài)并且測(cè)定各代細(xì)

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