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《羅非魚無乳鏈球菌分離、鑒定及致病性研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、羅非魚無乳鏈球菌的分離、鑒定及致病性研究張新艷，樊海平，鐘全福，卓玉琛，林煜，曾占壯（福建省淡水水產(chǎn)研究所，福建福州350002）摘要：從患暴發(fā)性流行病羅非魚的肝臟中分離獲得一株細菌TL60829NA；將TL60829NA對羅非魚進行人工感染致病性試驗，試驗感染羅非魚表現(xiàn)出自然發(fā)病癥狀，確認分離菌株為羅非魚暴發(fā)性流行病的致病菌。分離株菌經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察、BioMerieuxVitek全自動微生物分析系統(tǒng)GPI測定卡分析和16SrRNA特異性基因序列與NCBI中收錄的其它引起羅非魚病害的鏈球菌的16SrDNA序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育進化樹顯示，分離細菌與其它無乳鏈球菌的16S
2、rDNA序列構(gòu)成一個進化分支，而海豚鏈球菌則構(gòu)成另一分支，確定分離菌株為無乳鏈球菌(Streptococcusagalaciate)。分離菌株對氨芐西林、青霉素G、卡那霉素等28種試驗藥物敏感，對妥布霉素、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星等15種試驗藥物不敏感。由無乳鏈球菌引起的羅非魚暴發(fā)性流行病的主要病理變化為鰓小片結(jié)構(gòu)崩解，鰓上皮增生、融合；心肌纖維變性、肌間白細胞浸潤；肝臟顆粒變性和脂肪變性；腸道粘膜上皮變性、壞死、脫落、固有膜炎性白細胞浸潤；腎臟組織大量嗜中性白細胞浸潤，腎小管上皮細胞核固縮，小動脈血管壁玻璃樣變性；眼睛的脈絡(luò)膜和眶骨膜組織炎性壞死，晶狀體纖維斷裂和脫
3、離。關(guān)鍵詞：羅非魚；無乳鏈球菌；致病性；細菌鑒定；藥物敏感；組織病理中圖分類號：文獻標識碼：A文章編號：近年在福建、廣東、海南等省的養(yǎng)殖羅非魚中暴發(fā)一種流行病，病魚主要癥狀為：體色發(fā)黑，臨死前于水面打轉(zhuǎn)或間隙性竄游，部分病魚眼球突出或混濁發(fā)白，腹部體表具點狀或收稿日期：2007-11-28基金項目：福建省海洋與漁業(yè)科技項目(閩海漁科06214號)作者簡介：張新艷，（1980-），女，福建永泰人，碩士，從事水產(chǎn)養(yǎng)殖動物病害研究。TeL：0591-83732002，E-mail：swallowz47@163.com通訊作者：樊海平TeL：0591-83796968，E
4、-mail：fanhaiping@tom.com12斑塊出血或潰瘍，鰓蓋內(nèi)側(cè)出血，肝臟、膽囊、脾臟腫大，嚴重時糜爛，腸道和胃積水或積黃色粘液。流行于春、夏和秋季，流行高峰為5～9月，流行水溫25℃～37℃，主要危害親魚及100g以上的幼魚和成魚，傳染性強，發(fā)病率達10%～30%，死亡率達25%～80%，造成了嚴重的經(jīng)濟損失。本暴發(fā)性流行病的主要癥狀和流行情況與國內(nèi)報道的羅非魚海豚鏈球菌(Streptococcusiniae)病相似[1－3]，但國外報道羅非鏈球菌病的病原主要有無乳鏈球菌(S.agalaciate)和海豚鏈球菌[4]。本文報道由無乳鏈球菌引起的養(yǎng)殖羅
5、非魚暴發(fā)性流行病的病原菌分離、鑒定和致病性等研究結(jié)果。1材料與方法1.1試驗材料1.1.1試驗用魚2006年8月，自廣州鷺業(yè)水產(chǎn)公司獅嶺羅非魚養(yǎng)殖場采集具暴發(fā)性流行病典型癥狀的病魚；試驗用健康羅非魚取自福建省淡水水產(chǎn)研究所融橋中試基地的健康羅非魚(Oreochrimisniloticus×Oaureus)，體重為150±10g。塑料袋充氧運回實驗室，于水族箱暫養(yǎng)5d，暫養(yǎng)期間不投餌，連續(xù)充氣，水溫25℃～28℃，穩(wěn)定后1周后供人工感染用。1.1.2培養(yǎng)基、試劑、藥敏紙片營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、腦心浸液培養(yǎng)基（BHI）購自北京陸橋公司產(chǎn)品；血瓊脂、胰蛋白胨、酵母浸粉、瓊脂糖
6、購自廈門泰京生物技術(shù)公司；Taq酶、10×PCR緩沖液、dNTP、pMD-18T載體、DNAMarkerDL2000購自大連寶生物（Takara）公司；膠回收試劑盒、DH5α感受態(tài)細胞、無Dnase/Rnase水購自TIANGEN公司；引物fD1（5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'），rD1（5'-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3'）由上海鼎安測序公司合成；藥敏紙片購自北京天壇中國藥品生物制品檢定所。1.2試驗方法1.2.1涂片檢查病原體 以無菌器具解剖病魚，分別取鰓、肝臟、腎臟、脾臟、性腺、眼球等器官的小塊組織，于潔凈載玻片涂
7、片，風(fēng)干后，革蘭氏染色，于OlympusCX41油鏡下檢查。1.2.2病原菌的分離、純化 取活的具典型癥狀的病魚，無菌生理鹽水沖洗體表三遍，無菌解剖后，無菌接種環(huán)自肝臟、腎臟和體表潰瘍處取樣，BHI培養(yǎng)基平板劃線涂布，28℃恒溫培養(yǎng)36h～48h后，挑取形態(tài)一致的優(yōu)勢單菌落進一步劃線純化，直至獲得純培養(yǎng)物12后，接種營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基，28℃恒溫培養(yǎng)48h，加無菌甘油后，-80℃保存?zhèn)溆谩?.2.3人工感染試驗取-80℃保存的試驗用菌株接種BHI平板，28℃培養(yǎng)24h，無菌生理鹽水洗下培養(yǎng)物并10倍梯度稀釋成不同濃度的菌懸液，腹腔注射暫養(yǎng)穩(wěn)定后的試驗用健康羅非魚
8、，每尾注射
