實時熒光定量pcr在植物病害中的應(yīng)用

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1、中國惑學通攉2009，25(07)：52—56ChineseAgriculturalScienceBulletin實時熒光定量PCR在植物病害中的應(yīng)用徐小剛，劉雅婷(云南農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學與生物技術(shù)學院，昆明650201)摘要：實時熒光定量PCR技術(shù)作為一項新興技術(shù)，越來越受到人們的重視。它以快速、準確定量、便捷等優(yōu)點廣泛應(yīng)用于科學研究各個領(lǐng)域，近年來，實時熒光定量PCR技術(shù)在植物病害研究上不斷深入，大大提高了植物病害的檢測效率和監(jiān)測防治水平。結(jié)合了最近幾年來應(yīng)用于檢測和鑒定植物病原病害的實時熒光定量PCR過程

2、中引物與探針的設(shè)計、反應(yīng)過程、結(jié)果評價情況，綜合論述了實時熒光定量PCR技術(shù)在由真茵、細菌、病毒、線蟲引發(fā)的植物病害的檢測與應(yīng)用。關(guān)鍵詞：實時熒光定量PCR；Ct值；植物病害；引物設(shè)計；靈敏度中圖分類號：$432．4+1文獻標識碼：AApplicationofReal-timeFluorescenceQuantitativePCRinPlantDiseaseXuXiaogang，LiuYating(YunnanAgriculturalUniversityinAgricultureandBiotechnol

3、ogyInstitute，Kunming650201)Abstract：Asanemergingtechnology，moreandmorepeoplepayattentiontothereal—timefluorescencequantitativePCR．Ithasbeenwidelyusedindifferentresearchareas，sinceitisfast，accurate，andeasyuse．Inrecentyears，withthedevelopingandmoredetailedo

4、fthetechnology，ithasgreatlyimprovedtheeficiencyofdetectionandpreventionandtreatmentinplantdisease．Inthisreview．itwasintrodueedthatreal—timefluorescencequantitativePCRdetectsplantdiseaseinfectedbythefungus，bacterialvirusandnematode，thedesignofprimersandpro

5、bes，thereactionsandtheevaluationofreal—timefluorescencequantitativePCR．Keywords：real—timefluorescencequantitativePCR，Ct，plantdisease，primerdesign，sensitivity實時熒光定量PCR(Rea1．timefluorescence人們利用實時熒光定量PCR技術(shù)本身的優(yōu)越性把其quantitativePCR，RTFQPCR)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上把廣泛運用于醫(yī)學診斷

6、、海關(guān)檢驗檢疫、國防軍事、新型熒光共振能量轉(zhuǎn)移與熒光標記探針結(jié)合，巧妙地把核農(nóng)業(yè)、基礎(chǔ)研究等領(lǐng)域n。。目前尤其在動物醫(yī)學病理酸擴增、雜交、光譜分析和實時檢測技術(shù)融合在一起的和分子生物學研究領(lǐng)域應(yīng)用十分廣泛。而實時熒光一項創(chuàng)造性技術(shù)，它具有快速、靈敏、高通量、特異性定量PCR技術(shù)在植物病害研究上的報道較少，但是最強、自動化程度高、重復(fù)性好、準確定量等特點。1983近幾年實時熒光定量PCR技術(shù)的發(fā)展有力地促進了年美國PECetus公司的MULLIS博士發(fā)明了PCR技植物病害檢測研究水平，而且發(fā)揮著越來越重要的

7、作術(shù)，1992年HIGUCHI提出了實時PCR的設(shè)想”，繼而用，筆者將重點在這方面進行綜合論述。在1996年美國AppliedBiosystems公司研究出實時熒1實時熒光PCR的原理光定量PCR技術(shù)。實時熒光定量PCR技術(shù)發(fā)明至今，實時熒光定量PCR的原理是以熒光共振能量轉(zhuǎn)基金項目：云南省自然基金項目‘‘薊馬傳毒特性與番茄斑萎病毒病發(fā)生流行關(guān)系研究”(No．2005C0036M)：“番茄斑萎病毒(TswV)抗性破壞株系進化機制研究”(2007C0036M)；云南省教育廳自然基金項目“薊馬傳毒特性與番茄斑

8、萎病毒病發(fā)生流行關(guān)系研究”(No．5Y0171B)；國家973項目“農(nóng)業(yè)生物多樣性控制害蟲的效應(yīng)、原理和方法”(2o06cBl002O4)。第一作者簡介：徐小剛，男，1984~E，浙江衢州人，碩士在讀，專業(yè)：生物化學與分子生物學。研究方向：植物病毒病害鑒定。通信地址：650201云南省昆明市黑龍?zhí)对颇限r(nóng)業(yè)大學73號信箱，Tel：0871—5230273，E—mail：xiaoxiaogang2003@126．con。通訊作者：