豬硫辛酸合成酶lias基因的克隆及其原核表達

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1、分類號河南農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文密級英文題目：CloningandProkaryoticExpressionofLipoicAcid．SynthaseLiasGeneofPorcine．——導專論文提交日期：學位授予日期：河南農(nóng)業(yè)大學2013屆碩士研究生學位論文致謝本研究是在導師王林楓副教授和魯維飛老師的悉心指導下完成的，無論是在理論學習階段，還是在論文的選題、設(shè)計、研究和撰寫環(huán)節(jié)，我都得到了兩位老師的悉心指導和幫助。王林楓副教授學識淵博，具有敏銳的洞察力，他嚴謹?shù)闹螌W態(tài)度、忘我的工作熱情、縝密的思維方式以及探索真理的執(zhí)著精神，使我在學術(shù)研究、生活態(tài)度、為人處事等方

2、面都受益匪淺。感謝恩師三年來在學習上的引導、督促，在科研素質(zhì)、治學精神上的諄諄教誨，我將永遠銘記于心。此外，我由衷的感激魯維飛老師，他不僅在試驗設(shè)計和試驗操作中給予我了極大的幫助，還在思想、生活上給我以無微不至的關(guān)懷。值此論文完成之際，謹向兩位老師致以最誠摯的謝意!本研究的主要工作在河南農(nóng)業(yè)大學牧醫(yī)工程學院農(nóng)業(yè)部動物生化與營養(yǎng)重點試驗室完成，衷心感謝楊國宇教授、楊國慶教授、王月影副教授、李宏基副教授對我工作上的支持、指導和生活上的關(guān)心。衷心感謝本教研室的韓立強、朱河水、鐘凱、郭豫杰等老師對本課題提出的寶貴建議和熱情指導!感謝魯紹芳和孔江南兩位試驗員一直以來的支持，

3、感謝王叢梅和周博兩位師姐在試驗和生活中給予的大力幫助，感謝同屆研究生姜士凱、張曉梅、韓慧華、曲曉麗、劉鳳娟、劉國章等在試驗和生活中竭力相助，感謝高會貞、賈艷、姚亞楠、楊樹、張君、郭準、楊冉、王曉婷、張雪梅、韓瑩倩、杜麗麗、柳如意、劉福濤等師弟師妹在試驗和生活對我的關(guān)心和幫助!轉(zhuǎn)眼間，三年的研究生求學生活即將結(jié)束，站在畢業(yè)的門檻上，回首往昔，奮斗和辛勞成為絲絲的記憶，甜美與歡笑也都塵埃落定。這三年的求學生活對于會成為我美好的回憶，導師的教導，實驗室的同學們一起認真做實驗的的場景，生活里大家相親相愛，實驗失敗沮喪時有人安慰并幫忙分析失敗的原因，在實驗成功時一起分享喜悅

4、???從對這座城市的陌生到熟悉，從青澀到成熟，這三年的學習和生活，它給我?guī)硖嗟母袆?、感悟、成長，是我人生財富的重要積累。感謝我的室友史紅鴿、史超文、韓露、趙遷遷，從不同的地方來到這個陌生的城市，有著不同的生活習慣，但是生活中在我們都相互包容，相互幫助和鼓勵?，F(xiàn)在大家就要各奔前程，難忘一起走過的歲月。感謝我的家人，最后，我要特別感謝我最親愛的父母雙親。感謝你們二十多年的養(yǎng)育之恩，每當想起你們，任何感激的話都變得多余，淪為客套，心中只是暖暖的。我的每一點的收獲和進步都凝聚著你們的心血和汗水。正是由于他們無私的愛、默默地支持和鼓勵，才有了我的今天，他們在物質(zhì)上的幫助

5、和精神上的鼓勵，你們是我不斷取得進步的永恒動力。最后，謹以此文獻給所有關(guān)心支持我的老師、家人、同學和朋友!河南農(nóng)業(yè)大學2013屆碩士研究生學位論文目錄摘要??????????????????????????????????．．11文獻綜述?????????????????????????????????．．21．1硫辛酸的概述?????????????????????????????21．2硫辛酸合成酶Lias的概述???????????????????????．．31．3丙酮酸脫氫酶復合體的概述???????????????????????52弓I言??????

6、?????????????????????????????????????????．63材料與方法????????????????????????????????．．73．1豬Lias基因的克隆、序列分析與結(jié)構(gòu)預測????????????????．．73．1．1樣品采集????????????????????????????73．1．2菌株和質(zhì)粒???????????????????????????73．1．3主要儀器設(shè)備??????????????????????????73．1．4試劑??????????????????????????????73．1．4．1

7、試驗常規(guī)試劑???????????????????????．73．1．4．2SDS．PAGE電泳所用試劑及配制????????????????93．1．4．3Westernblot所用試劑及配制?????????????????113．1．5豬Lias基因的克隆???????????????????????．．113．1．5．1豬Lias基因克隆引物設(shè)計與合成???????????????113．1．5．2豬肝臟總RNA的提取???????????????????．123．1．5．3RNA的檢測????????????????????????123．1．5．4RT

8、-PCR擴