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《豬α1 干擾素基因的克隆與原核表達》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、中國農(nóng)學通報2010,26(11):1-6ChineseAgriculturalScienceBulletin豬α1干擾素基因的克隆與原核表達1211楊永勝，陳春花，宋勤葉，左玉柱（1河北農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，河北保定071001；2河北省邯鄲市動物疫病預防控制中心，河北邯鄲056005）摘要：根據(jù)豬α1干擾素（pocineinterferon-alpha1，poIFN-α1）的全基因序列（EU364896）設計合成1對特異引物，通過RT-PCR從三元雜交仔豬外周血淋巴細胞擴增出poIFN-α1全基因，將該基因克隆到p
2、GEM-T載體，構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEM-T-poIFN-α1，進行測序。以pGEM-T-poIFN-α1為模板，經(jīng)PCR擴增帶有酶切位點的poIFN-α1基因，將其定向克隆到原核表達載體pGEX-6P-1中，構(gòu)建重組表達載體pGEX-6P-poIFNα1，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）進行蛋白誘導表達和鑒定，并確定蛋白最佳表達條件。序列分析表明，克隆的poIFN-α1基因全長546bp，編碼181個氨基酸，前23個氨基酸組成信號肽，無糖基化位點。SDS-PAGE和Westernblotting證實重組表達菌經(jīng)IPTG誘導
3、后，可表達相對分子質(zhì)量約46ku的融合蛋白（GST-poIFN-α1）。當以1.0mmol/L的IPTG于37℃下誘導表達9h時，蛋白表達量最高。poIFN-α1基因的克隆與表達為進一步研究其抗病毒活性，開發(fā)病毒治療和疫苗免疫增強用生物制劑奠定了基礎。關鍵詞：豬α1干擾素；克隆；原核表達；鑒定中圖分類號：S852.4文獻標志碼：A論文編號：2009-2772CloneandProkaryoticExpressionofPorcineInterferon-α1Gene1211YangYongsheng,ChenChunh
4、ua,SongQinye,ZuoYuzhu(1CollegeofAnimalScienceandTechnology,HebeiAgriculturalUniversity,Baodinghebei071001;2HandanCenterforAnimalDiseaseControlandPrevention,Handanhebei056005)Abstract:Apairofspecificprimerforporcineinterferon-alpha1(poIFN-α1)wasdesignedandsynthes
5、izedaccordingtogenesequence(EU364896),andpoIFN-α1genewasamplifiedbyRT-PCRfromperipheralsbloodlymphocytes(PBLC)ofternaryhybridpiglet.ThenpoIFN-α1completegenewasclonedintopGEM-Tvectorandsequenced.Moreover,poIFN-α1genewithenzymesiteswasclonedintoprokaryoticexpressi
6、onvectorpGEX-6P-1toconstructrecombinantexpressionplasmidpGEX-6P-poIFN-α1andtransformitintoE.coliBL21(DE3).RecombinantpoIFNα1wasexpressedandidentifiedwithexpressionconditionsconfirmed.TheanalysisofsequenceindicatedthattheclonedpoIFN-α1geneconsistedof546bpencoding
7、181aminoacidswithasignalpeptideof23aminoacidsbutwithoutglycosylationsite.Theselectedrecombinantexpressedapproximatelya46kufusionproteinwithglutathioneS-transferase(GST)andpoIFN-α1whichwasdemonstratedbySDS-PAGEandWesternblotting.Theamountoffusionproteinreachedthe
8、highestwhentherecombinantswereinducedfor9hourson37℃with1.0mmol/LIPTG.CloneandexpressionofpoIFN-α1genelaidafoundationforthestudyofantiviralactivityandutilizationofpoIF
