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《利用分子標(biāo)記對桃_李_杏_梅_櫻類植物系統(tǒng)發(fā)育的分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、中國南方果樹2003;32(3):45～50453利用分子標(biāo)記對桃、李、杏、梅、櫻類植物系統(tǒng)發(fā)育的分析[1,2]程中平(1中國科學(xué)院武漢植物研究所武漢430074;2湖北省武漢市林業(yè)果樹研究所)提要采用RAPD技術(shù),利用從200個10堿基隨機(jī)引物中篩選的22個隨機(jī)引物對桃、李、杏、梅、櫻類植物中的223個試材進(jìn)行了DNA擴(kuò)增分析。結(jié)果表明:每個隨機(jī)引物都能在桃、李、杏、梅、櫻類植物的DNA擴(kuò)增帶中找到多態(tài),但每類植物沒有能區(qū)別其他類別的共有特征帶。對22個隨機(jī)引物180個位點上的RAPD帶進(jìn)行聚類分析,結(jié)合前人從形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)、孢粉學(xué)和酶學(xué)的研究結(jié)果,認(rèn)為桃、李、杏、梅、
2、櫻類植物可劃分為桃屬、李屬、杏屬和櫻屬。關(guān)鍵詞桃;李;杏;梅;櫻;RAPD;系統(tǒng)發(fā)育桃、李、杏、梅、櫻屬薔薇科核果類果樹,在它們的分屬上存在不同的意見。Benthamand[1][2]Hooker、許乃特氏(C.K.Schneider)和佩來氏(L.H.Bailey)將它們均劃歸為李屬[3,4](PrunusL.),然后再分不同亞屬;俞德浚則將它們分為李屬、桃屬、杏屬、櫻屬。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步,可以采用更多的方法從宏觀到微觀對于前人從形態(tài)學(xué)上的分類進(jìn)一步進(jìn)行研[5][6][7]究。魏文娜等、王業(yè)遴等、唐前瑞等通過細(xì)胞學(xué)、孢粉學(xué)、酶學(xué)對桃、李、杏、梅、櫻的親緣關(guān)系進(jìn)行了研究
3、,并且分析了它們的演化順序。近年發(fā)展起來的分子生物學(xué)技術(shù),使人們從遺傳物質(zhì)DNA本身去揭示生物內(nèi)在本質(zhì)的東西成為可能。筆者運用從200個隨機(jī)引物中篩選得到的22個10堿基隨機(jī)引物對223個桃、李、杏、梅和櫻類植物進(jìn)行了RAPD分子標(biāo)記,旨在為澄清他們的系統(tǒng)發(fā)育提供新的依據(jù)。1材料與方法1.1材料從中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研究所、江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所、北京市林業(yè)果樹研究所及武漢市的一些地方采集供試材料(見表1)。對采集的樣品,直接用鮮葉提取DNA,或放在7.2℃冰柜中貯存?zhèn)溆?。[8]1.2方法DNA提取:取采集的各桃種質(zhì)幼嫩葉1～2片,依照微量提取法提取DNA。PCR擴(kuò)
4、增及電泳檢測:應(yīng)用篩選的22個引物(見表2)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增條件采用經(jīng)優(yōu)化的反應(yīng)體系,PCR反應(yīng)的總體積25μl,其中含10×PCR緩沖液2.5μl,MgCl2(25mmol·-1-1-1l)2.0μl,dNTP(2mmol·l)2.5μl,TaqDNA聚合酶(5U·μl)0.24μl,引物(16.5ng·-1-1μl)2.0μl,模板DNA(10ng·μl)5.0μl。引物購自上海生工生物工程公司,PCR緩沖液、TaqDNA聚合酶、MgCl2和dNTP均購自上海普洛麥格生物產(chǎn)品有限公司。反應(yīng)液混勻后,在其上加一薄層礦物油。PCR擴(kuò)增儀為DNAThermalCycle
5、r480(thePerkin2ElmerCor2[9]poration,USA),PCR反應(yīng)條件同史永忠等采用的參數(shù)。擴(kuò)增完畢,在1.4%瓊脂糖凝膠-1(西班牙產(chǎn),加含EB0.5ug·ml)上電泳,以華美生物工程公司產(chǎn)LambdaDNA/EcoRI+TMHindⅢ和MBI(molecularbiologyproducts)產(chǎn)100bpDNALadderPlus(GeneRuler)作標(biāo)記,在紫外透射儀上觀察,照相。TM數(shù)據(jù)記錄與統(tǒng)計:用GeneRuler100bpDNALadderPlus和LambdaDNA/EcoRI+HindⅢ3湖北省武漢市晨光計劃項目(985003
6、074);華中農(nóng)業(yè)大學(xué)國家作物改良重點實驗室資助項目;中國科學(xué)院方向項目(KSCX22SW2320)。46中國南方果樹第32卷表1供試品種材料Table1Varieties(cultirars)collectedfortheexperiment紅葉李Hongyeli芙蓉李Furongli早黃李Zhaohuangli大石早生OishiPrunussalicinaP.salicinaP.salicinaP.salicina美人梅Meirenmei李Naili變綠萼Bianluer虎丘晚粉HuqiuwanfenP.salicina×P.salicinaAr.mumeAr.mum
7、eArmeniacemume山桃梅Shantaomei白須朱砂Baixuzhusha殘雪Chanxue淡豐后DanfenghouAr.mume×AmygdalusAr.mumeAr.mumeAr.mume×Ar.vulgarisdavidiana實生杏SeedlingApricot紅荷包Honghebao二花槽Erhuacao毛櫻桃MaoyingtaoAr.vulgarisAr.vulgarisAr.vulgarisCerasustomentosa東塘櫻桃Dongtangyingtao櫻花Cheeryblossom雷尼爾Lei
