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《shrna沉默cxcr4基因?qū)β殉舶┘?xì)胞egfr信號(hào)通路分子機(jī)制的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號(hào)：學(xué)號(hào)：2010025掣㈣㈣Y2441007泰山壓虧窿碩士學(xué)位論文論文題目：shRNA沉默CXCR4基因?qū)β殉舶┘?xì)胞EGFR信號(hào)通路分子機(jī)制的研究作者姓名：王愛霞學(xué)科、專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)位類型：學(xué)術(shù)學(xué)位型研究方向：婦科腫瘤指導(dǎo)教師：靳衛(wèi)國教授入學(xué)時(shí)間：2010年09月論文工作起止時(shí)間：2011年08～2013年01月目錄中文摘要???????????????????????????????????．1英文摘要??????????????????????????????????．3符號(hào)說明??????????
2、????????????????????????．5—1上．——L日Ⅱ青??????????????????????????????????????????????6材料與方法????????????????????????????????．9結(jié)果?????????????????????????????????????????????．2l討論?????????????????????????????????????????????．28結(jié)論??????????????????????????????????
3、???????????．35附圖????????????????·????????????????????????????。．．36本研究的創(chuàng)新點(diǎn)??????????????????????????????．41參考文獻(xiàn)?????????????????????????????????42綜j苤?????????????????????????????????????????????．49致謝?????????????????????????????????????????????．59攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論
4、文???????????????????????。60原創(chuàng)性聲明????????????????????????????????．61shRNA沉默CXCR4基因?qū)β殉舶┘?xì)胞EGFR信號(hào)通路分子機(jī)制的研究研究生：王愛霞專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)導(dǎo)師：靳衛(wèi)國教授中文摘要目的本課題組前期研究已經(jīng)證明以趨化因子4為靶向的shRNA能夠明顯抑制卵巢癌SW626細(xì)胞CXCR4mRNA及蛋白的表達(dá)，抑制細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力。因此，本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上更深一步研究抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。方法擴(kuò)增含CXCR4-shRN
5、A質(zhì)粒及空質(zhì)粒載體，利用陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染人卵巢癌細(xì)胞SW626細(xì)胞，本實(shí)驗(yàn)分為3組，干擾組(轉(zhuǎn)染CXCR4一shRNA的SW626細(xì)胞)、空載體組(轉(zhuǎn)染空載體的SW626細(xì)胞)及空白對(duì)照組(不給予任何處理的細(xì)胞)，轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，于倒置熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率；利用酶標(biāo)儀結(jié)合JC一1法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞線粒體膜電位的變化，采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR法檢測(cè)ASKlmRNA的表達(dá)情況。細(xì)胞免疫化學(xué)和／或WesternBlot檢測(cè)Caspase一3、EGFR、ERKl／2、P—C—Jun、Akt、TNF—Q、NFr,B
6、p65、Ir．B．Q蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果1．轉(zhuǎn)染48小時(shí)后在倒置熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率：當(dāng)細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，狀態(tài)良好，細(xì)胞匯合度達(dá)90％左右，按脂質(zhì)體與質(zhì)粒之比為1：1的比例進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染效率達(dá)到最高，人卵巢癌細(xì)胞SW626細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可達(dá)80％左右。2．JC一1法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后干擾組與空白對(duì)照組及空載體組相比，線粒體膜電位普遍降低(P<0．001)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸<0．05)，而空白組與轉(zhuǎn)染空載體組相比∽=0．234)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3．運(yùn)用RealtimeRT-PCR檢測(cè)，干擾組與空載體組及空
7、白對(duì)照組相比，ASKlmRNA的表達(dá)明顯增多(P<0．001)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4．采用細(xì)胞免疫化學(xué)及Westernblot蛋白印跡法，轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，干擾組與空載1體組及空白對(duì)照組比較，CXCR：4-shRNA干擾組細(xì)胞中EGFR蛋白及其下游信號(hào)分子ERKI／2、Akt、NFrBp65、TNF．a(chǎn)蛋白的表達(dá)較空白組及轉(zhuǎn)染空載體組均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸<0．05)，干擾組中CaspaSe．3、pC．Jun、Ir．．B．旺蛋白的表達(dá)顯著提高(P<0．05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論CXCR4一shRNA
8、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制可能是通過介導(dǎo)EGFR調(diào)控其下游信號(hào)因子，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。該分子機(jī)制的研究為今后卵巢癌的基因治療提供分子生物學(xué)依據(jù)。關(guān)鍵詞：趨化因子4；RNA干擾：EGFR；卵巢癌S7rUDIESoNT皿MOLECIⅡ。ARM匱CⅡANISMSoFTHEEGFRSIGNAL衛(wèi)．A1'丑岡剛【yoNSHoRTHAⅡ理礬RNA．INDUCEDCXCR4SⅡJENCD叮GoNov
