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《mir-301a在胃癌中的表達(dá)及意義和誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞克隆形成、侵襲和遷移的機(jī)制》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、論文題目：miR一301a在胃癌中的表達(dá)及其意義和誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞克隆形成、侵襲和遷移機(jī)制答辯委員會(huì)主席：鄭樹森答辯委員會(huì)成員：鄭樹森浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院張啟瑜溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院黃東勝浙江省人民醫(yī)院張勤浙江省人民醫(yī)院王躍東浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院論文答辯日期：2013年5月21日溫州醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文目錄中文摘要(關(guān)鍵詞>?????????????????????2英文摘要(關(guān)鍵詞)?????????????????????4前言????????????????????”““?????1／刖吾???????????
2、?????????”““?????第一部分miR-301a在胃癌細(xì)胞及組織中的表達(dá)及其臨床病理意義一、材料與方法??????????????????????9二、結(jié)果?????????????????????????20第二部分miR-301a體外對(duì)胃癌細(xì)胞克隆、侵襲和遷移能力影響研究???????????????????????????38一、材料與方法?????????????????????38二、結(jié)果????????????????????????4l第三部分miR-301a對(duì)靶基因NF—l(B蛋白表達(dá)的調(diào)控一、材
3、料與方法?????????????????????51二、結(jié)果????????????????????????60分析與討論???????????????????????65小結(jié)???·??????????????????????”73參考文獻(xiàn)????????????????????????74致謝?????????????????????·????··8l綜述及參考文獻(xiàn)?????????????????????82學(xué)位論文獨(dú)倉(cāng)吐性聲明???????????????????94溫州醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文miR-30la在胃癌中
4、的表達(dá)及意義和誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞克隆形成、侵襲和遷移的初．制中文摘要研究背景：在全球，胃癌的死亡率僅次于肺癌居第二位，在我國(guó)也是死亡率最高的惡性腫瘤之一，其5年生存率低于40％，早期診斷和治療是提高生存率的重要手段，因此尋找理想的早期診斷標(biāo)記物和治療靶點(diǎn)，對(duì)改善患者生存率有重要意義。MicroRNA是一類內(nèi)源性非編碼的功能性RNAs，大約2卜25個(gè)核苷酸，它通過調(diào)節(jié)mRNA的翻譯或降解而起到致癌或抗癌作用。其在腫瘤中的異常表達(dá)體現(xiàn)了其與人類腫瘤的形成、發(fā)生、發(fā)展的密切相關(guān)，針對(duì)miRNA與腫瘤的研究充分體現(xiàn)了miRNA參與基因調(diào)
5、控的復(fù)雜性，它們調(diào)控的靶基因關(guān)系著腫瘤細(xì)胞的分化、增殖、克隆、侵襲等，因此以miRNA為切入點(diǎn)，研究胃癌形成、發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過程中的作用及機(jī)制，為胃癌早期診斷、預(yù)后評(píng)估和靶向藥物治療等開辟了新的途徑。目的：檢測(cè)miR-30la在人胃癌細(xì)胞系(AGS、MKN一28、BGC一823、HCG一27、SGC一7901和MKN一45)、人正常胃上皮細(xì)胞GES-I表達(dá)，在人胃癌組織的表達(dá)及其臨床病理意義；探討miR-30la對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC一7901、HCG一27細(xì)胞克隆、侵襲和遷移的影響以及對(duì)靶基因NF-kB蛋白表達(dá)的調(diào)控。方法
6、：提取人胃癌細(xì)胞系(AGS、MKN一28、BGC一823、HCG一27、SGC一7901和MKN一45)、人正常胃上皮細(xì)胞GES-I及29例人胃癌組織及其配對(duì)的癌旁非腫瘤胃粘膜組織的miIiNAs，按miScriptReverseTranscriptionKit合成cDNA，miR-30la、靶基因NF—kB和U6引物購(gòu)自QIAGEN公司，用ABI7500FAST型熒光定量PCR儀進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR。將5．0×105個(gè)細(xì)胞／孔接種于6孔培養(yǎng)板中，37℃、混勻，5％C02孵育箱靜置培養(yǎng)24小時(shí)。按Lipofectamin
7、e2000說明書將NegativeControlB和miR-30la抑制物各2ul(50pmol／111)轉(zhuǎn)入SGC一7901和HCG一27細(xì)胞，轉(zhuǎn)染24小時(shí)后熒光顯微鏡檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率、RT—PcR檢測(cè)miR-30ta和靶基因N卜kB的表達(dá)水平，并觀察細(xì)胞克隆、侵襲和遷移能力。轉(zhuǎn)染72小時(shí)后WesternBlot法檢測(cè)靶基醫(yī)N卜kB的表達(dá)水平。應(yīng)用原位雜交技術(shù)檢泓miR-30ta在304例石蠟固定人胃癌組織芯片標(biāo)本的表達(dá)水平。2溫州醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文結(jié)果：miR-30la和靶基因在人胃癌細(xì)胞株AGS、Ⅷ(N一28、BGC一8
8、23、HCG一27、SGC一7901和MKN-45的表達(dá)量顯著高于人正常胃上皮細(xì)胞GES-1的表達(dá)量，miR-30la在76．67％(23／30)的胃癌組織高表達(dá)。人胃癌細(xì)胞株SC七一7901和HCG-27轉(zhuǎn)染miR-30la抑制物24小時(shí)后miR-30la的表達(dá)顯著降低。轉(zhuǎn)染miR一301a抑制物48
