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《大米蛋白酶法制備抗氧化肽的研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、江蘇大學(xué)博士學(xué)位論文大米蛋白酶法制備抗氧化肽的研究姓名：曹輝申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程指導(dǎo)教師：吳春篤20081215摘要以大米蛋白為原料研究抗氧化肽的制各技術(shù)及其性能。采用酶水解大米蛋白的方法生產(chǎn)高活性的抗氧化肽。以酶解液對DPPH自由基清除率為考察指標(biāo)，從七種商品蛋白酶中篩選出三種蛋白酶：風(fēng)味酶、中性酶、木瓜蛋白酶；分別進(jìn)行正交試驗(yàn)，得出三種酶在各自最佳作用條件下對DPPH自由基清除率分別為75．2％、89．5％和58．8％；大米抗氧化肽的ECso值分別為2．92mg／mL、2．
2、17mg／mL和3．86mg／mL。在各自最佳反應(yīng)條件下得到的三種酶的水解產(chǎn)物，進(jìn)行DPPH自由基清除率和EC50值的橫向比較，最終確定中性蛋白酶為本試驗(yàn)用酶，其最佳制備工藝參數(shù)為，底物濃度109／100ml，加酶量8％，酶解pH6．0，酶解溫度60。C，時(shí)間30min。在大米蛋白單酶水解實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，將選出的三種酶兩兩組合，進(jìn)行雙酶分步水解試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)加酶順序?qū)λ猱a(chǎn)物的抗氧化活性有較大的影響；同時(shí)第一步酶解后滅酶明顯優(yōu)于不滅酶。最終比較得到最優(yōu)組合：大米蛋白先經(jīng)中性酶水解30min，滅酶后再由木瓜酶水
3、解15min，得到的酶水解產(chǎn)物ECso為1．23mg／mL,與單酶相比下降了43．3％。在超聲功率1500W、超聲初始溫度40℃條件下超聲處理大米蛋白溶液20min，再用中性酶水解制備抗氧化肽，其DPPH自由基清除率可達(dá)至1J74．8％，ECso為0．932mg／mL。超聲處理原料使水解產(chǎn)物I拘IEC50江蘇大學(xué)博士學(xué)位論文：大米蛋白酶法制備抗氧化肽的研究值比沒做處理的顯著下降了57．1％。研究了制備得到多肽的抗氧化性能試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)大米抗氧化肽具有較強(qiáng)的清除OZ．-DPPH自由基、羥自由基，其EC50分
4、別為0．0678mg／mL、0．932mg／mL和0．117mg／mL。以732陽離子交換樹脂、SepHadex．G25和HPLC制備柱純化大米抗氧化肽，最終研究得到兩種抗氧化肽。使用美國ABI的串聯(lián)飛行質(zhì)譜儀4700TOF／TOF對分離到的抗氧化肽進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，得到兩個(gè)多肽序列分別為Gly．Val．Pro．Ser-Ala．Val．Ser-Arg-Asn-Met—Thr-Arg-Ser-Arg和Leu一燦a-Ser-Gln-His-Leu-Val-Ala-lie—Leu—Asp-Pro—Pro-Arg
5、，其EC50值分別為：4．911xM和5．39}tM。關(guān)鍵詞：大米蛋白，抗氧化肽，超聲，酶解，制備技術(shù)，性能ⅡABSTRACTThepreparationtechnologyofanti—oxidantpeptides，whichderivedfromhydrolysisofriceproteinbyenzyme，andthepeptides'scharacteristicswereinvestigatedinthisstudy．Threecommercialproteases，flavor,neut
6、ral，andpapain，wereselectedfromsevenonesaccordingtotheeliminationratesof1,1··Diphenyl—-2·-picrylhydrazylpPP馬freeradicalofhydrolytes．Orthogonaltestswereperformedtodetermintherespectiveoptimumhydrolysisconditionofeachprotease．AndthediminationrateofDPPHfree
7、radicalofeachoptimumhydrolyzedsolutionwere75．2％．89．5％and58．8％，respectively．ThevaluesofECsooftheanti—oxidantpepfideproductswere2．92me／mL，2．17me／mE,and3．86me／mL,respectively．TheneutralproteaseWaSpreferredbecausethehydrolatebytheneutralproteaseshowedthehig
8、hestanti—oxidantactivityinthethreeones．Andtheoptimalenzymatichydrolysistechnologicparameterswereasfollowings：theconcentrationofsubstrate10e／100ml，thequantityofprotease8％，pH6．0at60"Cfor30min．Thecombinationsoftwoenzymatichydrolysis
