熱預(yù)處理后嗅鞘細(xì)胞上清液誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元定向分化的研究

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1、分類號R74神戮需囂裟嵩鬻毳究神經(jīng)千細(xì)胞向神經(jīng)元定問分化嗣餅艽．RegulationanddirectionofNSCs伽2dop乇neuronalfatebyhyperthermiaconditioned研究生姓名指導(dǎo)教師姓名、職稱學(xué)科專業(yè)研究方向湖南師范大學(xué)學(xué)位評定委員會辦公室二零一四年四月==篡鬻一一溉摘要f刪舢舢㈣㈣舢刪刪目的：近年來大量研究證實(shí)嗅鞘細(xì)胞(otfactoryensh三五矗：i騎姜在加入370CM組、400CM組和400CM+R組上清液誘導(dǎo)后，通過免疫熒光計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)，400CM組中分化細(xì)胞神經(jīng)元標(biāo)志物

2、B微管蛋白(p碩士學(xué)位論文一tublinIII，Tuj—1)、微管相關(guān)蛋白2(microtubule-associatedprotein2，MAP一2)陽性細(xì)胞數(shù)目(31．40±1．08％、31．80±1．60％)顯著高于370CM組(23．60+1．36％、22．80+1．66％)和400CM+R組(22．60±1．50％、24．00_+2．30％)，370CM與400CM+R兩組之間Tuj-I、MAP一2附l生細(xì)胞數(shù)目無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Western—blot也證實(shí)，在400CM誘導(dǎo)組中，Tuj—l蛋白表達(dá)顯著高于370

3、CM組和400CM+R組，而370CM和400CM+R兩組之間Tuj—l、MAP一2蛋白表達(dá)無顯著差異。RT—PCR結(jié)果示400EC組HIF一1Q及其下游靶基因EPO、VEGF轉(zhuǎn)錄水平較370EC、400EC+R組明顯增高；Westernblot結(jié)果提示400EC組HIF—lQ蛋白表達(dá)含量顯著高于370EC、400EC+R組；glisa檢測發(fā)現(xiàn)400CM組中EPO、VEGF含量顯著高于370CM、400CM+R組。結(jié)論：OECs經(jīng)熱預(yù)處理后，其上清液能更有效的誘導(dǎo)NSCs向神經(jīng)元定向分化，提高其分化比例。熱預(yù)處理后HIF

4、—lQ表達(dá)上調(diào)是促進(jìn)NSCs向神經(jīng)元定向分化的重要因素，HIF—lQ下游靶基因EPO、VEGF激活和表達(dá)可能是提高Nscs向神經(jīng)元分化比例的機(jī)制之一。關(guān)鍵詞：嗅鞘細(xì)胞；熱預(yù)處理；神經(jīng)干細(xì)胞；分化；低氧誘導(dǎo)因子一l熱預(yù)處理后嗅鞘細(xì)胞上清液誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元定向分化的研究ABSTRACTRegulationanddirectionofNSCstoadoptneuronaIfate0lIN5USIbyhyperthermiaconditionedOEOsserum-freeconditionedmediumObjectiv

5、eRecentstudiesprovidesolidevidencefortheimportancetodelineatethecombinedtransplantationofneuralstemcells(NSCs)andolfactoryensheathingcells(OgCs)fortherepairofcentralnervoussysteminjury．Oneofthelimitationsofthisapproachisthattheproportionofneuronsdifferentiatedfro

6、mNSCsstillremainsatlowlevel．Thus，howtoinduceNSCstodifferentiateintoneuronsmoreefficientlybyOgCsisanattractiveproblem，whichneedsattentiontoberesolved．Inthepresentstudy，weinvestigatedtheeffectsofhyperthermia—conditionedogc—conditionedmedium(OCM)oninductionofNSCsint

7、oneurons．Methods3-day—oldpostnatalmousewerekilled，andtheolfactorybulbs(OBs)weredissected．Theconditionedmedia，named370CM，400CM，and400CM+R(treatedwithHIF一1Qinhibitor)，werecollectedafterOgCshadbeenincubatedat37℃or40oCfor6hr，followedbyincubationat37℃for42hr．Cellviabi

8、litiesofOgCsweremeasuredusinganMTTassay．Then，theseconditionedmediumwerecollectedandusedforNSCIII碩士學(xué)位論文induction．TheeffectsofhyperthermicpreconditioningonOECsHI