嗅鞘細(xì)胞體外誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞定向分化的研究

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1、第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文嗅鞘細(xì)胞體外誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞定向分化的研究姓名：穆麗芳申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)生物學(xué)指導(dǎo)教師：何成20080401第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文．4．NSCsCNSECMoECsCTXB104bFGFPLLCMFiIGFAPSVZSGZOPCsEGFCSPG三、縮略詞表neuralstemcellcentralnervoussystemextracellularmatrixolfactoryensheathingcellscortexcellcultureB104neuroblatomacellsbasicfibroblastgro

2、wthfactorPoly··L··LysineconditionedmediumfixedcellCO．culturegliafibrillaryacidicproteinsubventricularzonesubgranularzoneoligodendroeyteprecursorcellsepidermalgrowthfactorchondroitinsulphatepeoteoglycan神經(jīng)干細(xì)胞中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞外基質(zhì)嗅鞘細(xì)胞大腦皮層混合細(xì)胞神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株堿性成纖維生長因子左旋多聚賴氨酸條件培養(yǎng)液固定細(xì)胞共培養(yǎng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白側(cè)腦室室下

3、區(qū)海馬齒狀回亞粒區(qū)少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞表皮細(xì)胞生長因子硫酸軟骨素蛋白多糖獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名：手簽字日期：N年．廣月如日學(xué)位論文使用授權(quán)書聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)第二軍醫(yī)大學(xué)可以將學(xué)位論文

4、的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：柑導(dǎo)師簽名：簽字日期：加·3年疹月知日簽字日期：炒孑年∥月≯日嗅鞘細(xì)胞體外誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞定向分化的研究一、中文摘要神經(jīng)干細(xì)胞(neuralstemcell，NSCs)是指具有分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的能力，能夠自我更新，并提供大量神經(jīng)細(xì)胞的原始細(xì)胞群。近年來，有關(guān)NSCs的研究已成為神經(jīng)生物學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，因?yàn)樗仁茄芯可窠?jīng)系統(tǒng)發(fā)育和神經(jīng)細(xì)胞分化的良好載體，又是治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)(centralnerv

5、oussystem，CNS)損傷以及退行性疾病最理想的供體細(xì)胞來源之一。目前，原位誘導(dǎo)內(nèi)源性NSCs增殖分化或NSCs移植已被嘗試用于治療帕金森癥、亨廷頓病、癲癇、腦缺血和中樞創(chuàng)傷等多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。研究表明，內(nèi)源性NSCs激活或外源性NSCs移植可以明顯緩解疾病的臨床癥狀，并在一定程度上促進(jìn)受損功能的恢復(fù)。NSCs定向誘導(dǎo)分化為成熟的具有功能的神經(jīng)元或膠質(zhì)細(xì)胞是使其能應(yīng)用于臨床治療的關(guān)鍵問題。研究發(fā)現(xiàn)，NSCs的分化與其所處微環(huán)境密切相關(guān)。微環(huán)境主要由各種可溶性因子、膜結(jié)合因子和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)等眾多復(fù)雜的成分所構(gòu)成，這些成分相互影響，相互協(xié)

6、調(diào)，通過細(xì)胞間相互作用的方式參與NSCs的分化發(fā)育和功能調(diào)節(jié)。因此，深入的研究微環(huán)境對NSCs分化的調(diào)節(jié)作用，對臨床治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病具有重要意義。近年來，嗅鞘細(xì)胞(olfactoryensheathingcells，OECs)移植被認(rèn)為是脊髓損傷最有前景的治療方法之一。動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，OECs移植可以促進(jìn)大鼠皮質(zhì)脊髓束再生，并促進(jìn)肢體運(yùn)動功能恢復(fù)。臨床實(shí)驗(yàn)也顯示，人OECs種植于脊髓損傷患者的脊髓中，可以部分改善脊髓功能。研究發(fā)現(xiàn)，移植的OECs可以通過多種機(jī)制促進(jìn)神經(jīng)再生。移植的OECs通過分泌多種細(xì)胞黏附分子和神經(jīng)營養(yǎng)因子，使脫髓鞘的軸突重新生成髓鞘

7、，為軸突的再生提供一個良好的微環(huán)境；同時形成一個化學(xué)和物理屏障來防止再生軸突與膠質(zhì)瘢痕中的抑制因子接觸，進(jìn)而促進(jìn)脊髓損傷修復(fù)。然而，移植OECs對中樞內(nèi)源性NSCs增殖和分化是否具有影響目前還知之甚少。本實(shí)驗(yàn)旨在研究OECs對NSCs分化的影響及其可能的作用機(jī)制，為研究OECs在CNS損傷修復(fù)中的生物學(xué)機(jī)制提供新的線索，同時也為NSCs移植用于神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病及CNS損傷的臨床治療提供一些新的思路。在研究中，我們首先從成年新生(24小時內(nèi))GFP轉(zhuǎn)基因小鼠大腦皮質(zhì)區(qū)分離培養(yǎng)，鑒定NSCs，然后采用細(xì)胞共培養(yǎng)模型，比較OECs，大腦皮層混合細(xì)胞(CTX

8、)，神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株(B104neuroblatomacells，B104cells)對NSC