青島文昌魚sra基因克隆、表達(dá)及進(jìn)化分析的研究

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1、獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得山東理工大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名:時(shí)間:年月日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解山東理工大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤,允許論文被查閱和借閱;學(xué)??梢杂貌煌绞皆?/p>

2、不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)研究生簽名:時(shí)間:年月日導(dǎo)師簽名:時(shí)間:年月日萬方數(shù)據(jù)山東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要摘要文昌魚屬于脊索動(dòng)物門中的頭索動(dòng)物亞門,處于由無脊椎動(dòng)物到脊椎動(dòng)物的過渡位置。作為從無脊椎動(dòng)物到脊椎動(dòng)物過渡階段的典型動(dòng)物,文昌魚一直是研究動(dòng)物進(jìn)化和胚胎發(fā)育的模式動(dòng)物。SRA基因是一種類固醇激素受體的轉(zhuǎn)錄輔激活因子,也是首次發(fā)現(xiàn)的可以從RNA和蛋白質(zhì)兩個(gè)水平上發(fā)揮作用的分子。目前

3、,對SRA基因的研究主要集中在在脊椎動(dòng)物中,而在進(jìn)化上占據(jù)關(guān)鍵位置的文昌魚中是否存在SRA基因還不清楚。本論文首先通過5’-RACE技術(shù)克隆了青島文昌魚SRA基因,命名為AmphiSRA。AmphiSRA基因序列全長1542bp,含有一個(gè)525bp的最大開放閱讀框(ORF),編碼有174個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì),推測其分子量約為19.5kDa。5’端含有一段165bp的非翻譯區(qū)(UTR),3’端含有一段852bp的非翻譯區(qū)。序列經(jīng)NCBIBLASTP程序比對,發(fā)現(xiàn)其具有完整的SRA基因家族編碼框。我們利

4、用Northern雜交的方法,對AmphiSRA基因是否在青島文昌魚中存在和大小進(jìn)行了鑒定。雜交結(jié)果顯示出三條條帶,大小分別約為4kb,1.6kb和500bp,我們得到的cDNA與其中一條大小一致。利用整體原位雜交檢測文昌魚的成體切片以及各時(shí)期的胚胎發(fā)現(xiàn),AmphiSRA廣泛分布于文昌魚各個(gè)組織中,在脊索、神經(jīng)索、鰓、腸以及卵巢和精巢中表達(dá)尤其明顯,并且胚胎和成體中的表達(dá)情況一致。AmphiSRA是否屬于表達(dá)蛋白質(zhì)類型,我們通過構(gòu)建原核表達(dá)載體,在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)來解決這一問題。通過對重組菌株的S

5、DS-PAGE,我們發(fā)現(xiàn)AmphiSRA確實(shí)如我們推測的那樣,屬于可以表達(dá)蛋白質(zhì)的亞型。經(jīng)過His-tag抗體進(jìn)一步的Western雜交鑒定,確實(shí)得到了特異性表達(dá)。關(guān)鍵詞:青島文昌魚;AmphiSRA;基因克??;原位雜交;原核表達(dá)I萬方數(shù)據(jù)山東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文ABSTRACTABSTRACTAmphioxusbelongstothecephalochordate,andisexposedtothepositionoftheinvertebratestovertebrates.Asaresult,

6、amphioxushaslongbeenregardedasthemostimportantanimaltostudytheoriginandevolutionofvertebrates.SRA,asteroidreceptorcoactivator,isthefirstfoundmoleculethathastheunusualpropertytofunctionbothattheRNAandtheproteinlevels.sites.Numerousinvestigationshavebeen

7、carriedoutininvertebrates,butlittleisknowntodateaboutitintheamphioxusBranchiostomabelcheri.Inthispaper,weused5’-rapidamplificationofcDNAends(RACE)toobtainthefull-lengthsequenceofSRAfromAmphioxusBranchiostomabelcheritsingtauense,namedAmphiSRA.Thefulllen

8、gthofAmphiSRAcDNA(GenBankaccessionnumber:JN384108)obtainedwas1542bplongwitha5’-untranslatedregion(UTR)of165bpanda3’-UTRof852bpwiththepolyadenylationsignalandapolyadenylationtail.TheORFofAmphiSRAencodedapolypeptideof174aminoacidswithacal

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