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《基于rna干擾技術(shù)的加工番茄抗cmv、tomv的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、分類號(hào)：密級(jí)：無(wú)學(xué)號(hào)：2009207011單位代碼：10759石河子大學(xué)博士學(xué)位論文基于RNA干擾技術(shù)的加工番茄抗CMV、ToMV的研究學(xué)位申請(qǐng)人喬亞紅指導(dǎo)教師向本春教授鄭銀英副教授申請(qǐng)學(xué)位門類級(jí)別農(nóng)學(xué)博士學(xué)科、專業(yè)名稱作物遺傳育種研究方向植物分子育種與荒漠半荒漠地區(qū)作物種質(zhì)創(chuàng)新所在學(xué)院農(nóng)學(xué)院中國(guó)·新疆·石河子2013年6月TheStudiesonTransgenicMaterialsofProcessingtomatoagainstCMVandToMVinxinjiangADissertationSubmitt
2、edtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsFortheDegreeofDoctorofAgricultureByQiaoYahong(Cropgeneticandbreeding)Dissertationsupervisor:Professor.XiangBenchunProfessor.ZhengYinyingJune,2013石河子大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人所呈交的學(xué)位論文是在我導(dǎo)師的指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作
3、及取得的研究成果。據(jù)我所知，除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含其他個(gè)人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。研究生簽名：時(shí)間：年月日使用授權(quán)聲明本人完全了解石河子大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國(guó)家主管部門或指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版。有權(quán)將學(xué)位論文在學(xué)校圖書館保存并允許被查閱。有權(quán)自行或許可他人將學(xué)位論文編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)提供檢索服務(wù)。有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。研究生簽名
4、：時(shí)間：年月日導(dǎo)師簽名：時(shí)間：年月日摘要植物病毒病是近年來(lái)嚴(yán)重危害加工番茄的主要病害之一，這與加工番茄種植面積不斷擴(kuò)大、栽培時(shí)間持續(xù)和重茬地大面積增加密切相關(guān)。黃瓜花葉病毒(Cucumbermosaicvirus，CMV)和番茄花葉病毒（Tomatomosaicvirus，ToMV）是嚴(yán)重危害加工番茄的兩個(gè)主要病毒。在實(shí)際生產(chǎn)中，這兩種病毒往往復(fù)合侵染加工番茄，使加工番茄上出現(xiàn)嚴(yán)重的條斑壞死癥狀，果實(shí)則表現(xiàn)為僵小畸形，表面易形成褐色斑塊。嚴(yán)重影響加工番茄的產(chǎn)量和品質(zhì)。多年來(lái)，人們一直都在努力地尋找解決病毒病對(duì)農(nóng)作
5、物的危害方法，而抗病毒育種是目前解決這一難題的主要策略，由于傳統(tǒng)育種方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力等局限性，從而大大地限制了育種工作的進(jìn)程。近年來(lái)，隨著植物基因工程技術(shù)的快速發(fā)展，尤其是RNAi技術(shù)的發(fā)展為解決這一難題開(kāi)辟了一條新的途徑。本研究以從加工番茄上分離出來(lái)的黃瓜花葉病毒分離物NS0-4和番茄花葉病毒分離物SCS-2的全長(zhǎng)基因序列設(shè)計(jì)干擾靶序列，利用RNAi技術(shù)構(gòu)建了一條抗CMV和ToMV加工番茄的技術(shù)體系。本文的主要研究?jī)?nèi)容如下:1.RNAi載體的構(gòu)建：利用軟件對(duì)CMV分離物NS0-4和ToMV分離物SCS-2全長(zhǎng)基因序
6、列進(jìn)行分析，設(shè)計(jì)干擾片段，通過(guò)同位酶(BamHI/BglII)將兩個(gè)干擾片段的序列進(jìn)行拼接，同時(shí)以一段大小為266bp的核苷酸序列為內(nèi)含子，構(gòu)建了4個(gè)RNAi載體（pBi35STC4、pBi35STC9、pBi35STC12和pBi35STC14）。2.煙草遺傳轉(zhuǎn)化的研究：分別將4個(gè)重組質(zhì)粒通過(guò)電擊的方法導(dǎo)入農(nóng)桿菌GV3101中，通過(guò)菌落PCR鑒定，表明重組質(zhì)粒已被成功導(dǎo)入到農(nóng)桿菌中。然后利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法轉(zhuǎn)化普通煙（Nicotianatabacum），經(jīng)過(guò)卡那霉素（50mg/L）篩選及PCR鑒定，結(jié)果表明在
7、轉(zhuǎn)pBi35STC4的56株再生煙草植株中，有32株為轉(zhuǎn)基因煙草；在轉(zhuǎn)pBi35STC9的44株再生煙草植株中，有28株為轉(zhuǎn)基因煙草；在轉(zhuǎn)pBi35STC12的58株再生煙草植株中，有35株為轉(zhuǎn)基因煙草；在轉(zhuǎn)pBi35STC14的50株再生煙草植株中，有30株為轉(zhuǎn)基因煙草。3.煙草上RNAi效果的初步評(píng)價(jià)：將轉(zhuǎn)基因煙草、野生型煙草進(jìn)行如下3種處理：第一種處理只接種CMV；第二種處理只接種ToMV；第三種處理同時(shí)接種CMV和ToMV。通過(guò)癥狀觀察及RT-PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示在接種20d野生型煙草100%均表現(xiàn)出了不
8、同程度的病毒癥狀，在接種30d，轉(zhuǎn)pBi35STC9煙草中近50%表現(xiàn)出了不同程度的病毒癥狀，而其余50%的煙草在40d后也表現(xiàn)出不同的病毒癥狀；而轉(zhuǎn)pBi35STC4、pBi35STC12和pBi35STC14煙草中，有10%～30%則在接毒40d表現(xiàn)出了病毒癥狀，結(jié)果表明在T0代轉(zhuǎn)基因煙草中，轉(zhuǎn)pBi35STC4、pBi35STC12和pBi35STC14煙草可延遲病
