基質(zhì)金屬蛋白酶16在食管鱗癌中的表達(dá)及其生物學(xué)功能

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1、廈門大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當(dāng)方式明確標(biāo)明，并符合法律規(guī)范和《廈門大學(xué)研究生學(xué)術(shù)活動(dòng)規(guī)范(試行)》。另外，該學(xué)位論文為()課題(組)的研究成果，獲得()課題(組)經(jīng)費(fèi)或?qū)嶒?yàn)室的資助，在()實(shí)驗(yàn)室完成。(請(qǐng)?jiān)谝陨侠ㄌ?hào)內(nèi)填寫課題或課題組負(fù)責(zé)人或?qū)嶒?yàn)室名稱，未有此項(xiàng)聲明內(nèi)容的，可以不作特別聲明。)聲明人(簽名)：取萬(wàn)qpJ弓年‘月q-日廈門大學(xué)學(xué)位論文著作權(quán)使用聲明本人同意廈門大學(xué)根據(jù)《中華人民共和國(guó)學(xué)位條例

2、暫行實(shí)施辦法》等規(guī)定保留和使用此學(xué)位論文，并向主管部門或其指定機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文(包括紙質(zhì)版和電子版)，允許學(xué)位論文進(jìn)入廈門大學(xué)圖書館及其數(shù)據(jù)庫(kù)被查閱、借閱。本人同意廈門大學(xué)將學(xué)位論文加入全國(guó)博士、碩士學(xué)位論文共建單位數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版，采用影印、縮印或者其它方式合理復(fù)制學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于：()1．經(jīng)廈門大學(xué)保密委員會(huì)審查核定的保密學(xué)位論文，于年月日解密，解密后適用上述授權(quán)。()2．不保密，適用上述授權(quán)。(請(qǐng)?jiān)谝陨舷鄳?yīng)括號(hào)內(nèi)打“√”或填上相應(yīng)內(nèi)容。保密學(xué)位論文應(yīng)是已經(jīng)廈門大學(xué)保密委員會(huì)審定過(guò)

3、的學(xué)位論文，未經(jīng)廈門大學(xué)保密委員會(huì)審定的學(xué)位論文均為公開學(xué)位論文。此聲明欄不填寫的，默認(rèn)為公開學(xué)位論文，均適用上述授權(quán)。)聲明人(簽名)：曇和鋤叼年(月千日摘要背景及目的食管癌是世界第六大癌癥死因，臨床上多數(shù)患者就診時(shí)已經(jīng)進(jìn)入中晚期，手術(shù)效果差，五年生存率僅徘徊在10％---20％。其治療效果不佳的主要原因是腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移?；|(zhì)金屬蛋白酶是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中周圍基質(zhì)降解和重塑得重要酶，但MMP抑制劑在多種癌癥患者身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，這種藥物無(wú)法減緩腫瘤生長(zhǎng)，有時(shí)甚至加快腫瘤生長(zhǎng)，這提示并非所有MMP均為原癌基因。基質(zhì)金屬蛋

4、白酶．16在多種腫瘤組織中有較高的表達(dá)，但在食管癌中的表達(dá)及與食管癌侵襲和轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究目前尚未有報(bào)道。我們檢測(cè)食管癌組織標(biāo)本MMP．16的表達(dá)水平與臨床病理資料的相關(guān)性，并采取RNA干擾的方法，建立了有效的MMP．16基因沉默的Ecal09細(xì)胞株，觀察食管鱗癌細(xì)胞在遷移和侵襲方面的改變，研究食管鱗癌治療的策略以及探討食管癌的治療的基因靶點(diǎn)。方法1．應(yīng)用免疫組化、Westernblot及RealTimePCR檢測(cè)食管癌及配對(duì)遠(yuǎn)癌組織的MMP．16蛋白及MMP．16mRNA表達(dá)情況及I臨床意義。2．對(duì)食管鱗癌高分化細(xì)胞系Ec

5、9706、Ecl09、TEl進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)，我們從mRNA和蛋白水平方面，采取RealTimePCR和Westernblot檢測(cè)這3種細(xì)胞系中MMP一16的表達(dá)，并篩出相對(duì)高表達(dá)MMP．16的細(xì)胞系。3．設(shè)計(jì)合成4對(duì)MMP．16基因的shRNA(shRNA．1，2，3，4)，采用陽(yáng)離子聚合物試劑穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Ecl09，利用RealTimePCR和Westernblot檢測(cè)穩(wěn)轉(zhuǎn)shRNA后MMP．16mRNA及蛋白的沉默效果，并篩選出合適的轉(zhuǎn)染條件和干擾效率最高的shRNA，以利于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。4．取干擾效率最高的shRN

6、A，應(yīng)用WST-1及流式細(xì)胞儀檢測(cè)MMP．16基因表達(dá)下調(diào)后細(xì)胞增殖及凋亡情況；應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MMP．16基因表達(dá)下調(diào)后食管癌細(xì)胞遷移能力的變化；應(yīng)用Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MMP．16基因表達(dá)下調(diào)后，食管癌細(xì)胞Ecl09侵襲能力的改變。結(jié)果1．MMP．16蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本中的低表達(dá)，在配對(duì)的遠(yuǎn)癌組織高表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸

7、2．3種食管鱗癌高分化細(xì)胞株均有MMP．16基因表達(dá)，其中MMP．16在Eel09細(xì)胞系中表達(dá)明顯高于其它2種食管癌細(xì)胞株，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義釁0．05)；3．4組shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)組MMP．16基因在mRNA和蛋白水平上均有顯著沉默效果，基因沉默效果分別為shRNA-1(89％)、shRNA一2(96％)、shRNA．3(80％)、shRNA．4(92％)。其中shRNA．2干擾效率最高，與空白對(duì)照及陰性對(duì)照組比較，差異具有顯著性意義(P

8、RNA．2干擾組與對(duì)照組增殖能力無(wú)顯著性差異；流式細(xì)胞儀檢測(cè)shRNA．2干擾組與對(duì)照組凋亡能力明顯減退，有顯著性差異(P<0．05)；細(xì)胞劃痕72h后shRNA．2轉(zhuǎn)染組細(xì)胞劃痕明顯愈合，而陰性對(duì)照組愈合較少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P