創(chuàng)傷弧菌溶細(xì)胞素中類蓖麻毒素功能模序的細(xì)胞毒性研究

《創(chuàng)傷弧菌溶細(xì)胞素中類蓖麻毒素功能模序的細(xì)胞毒性研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、論文題目：劍籩殛菌盜細(xì)胞蠢生婁蓖鏖壹蠢功能槿莊的細(xì)胞壹：眭班究答辯委員會(huì)主席：拯瞳縫夔攫答辯委員會(huì)成員：芒態(tài)夔攫昌越越目錄中文摘要????????????????????．．1英文摘要?????????????????????3前言?????????????????????．．5刖吾???????????????????????????5第一部分材-t4-與方法???????????????????．7結(jié)果??????????????????????????23：口術(shù)??????????????????????????‘3分析討論?????

2、??????????????．29第二部分材料與方法??????????????????．31結(jié)果??????????????????????????37；口木??????????????????????????J，分析討論???????????????????．．41／J、結(jié)??????????????????????????43參考文獻(xiàn)????????????????????????44附錄????????????????????46致謝??????????????????????????52綜述????????????????????

3、??????53獨(dú)創(chuàng)性聲明??????????????????．61溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文創(chuàng)傷弧菌溶細(xì)胞素中類蓖麻毒素功能模序的細(xì)胞毒性研究目的：中文摘要1、創(chuàng)傷弧菌溶細(xì)胞素(rVvhA)中類蓖麻毒素功能模序(VVC硒。inB1諏。)的表達(dá)、純化及復(fù)性。2、明確WC黜。岫B1溉是否具有溶血活性。3、闡明WC黜咖B1‘k。對(duì)HeLa細(xì)胞的細(xì)胞損傷相關(guān)機(jī)制。4、了解VVC砌?！畁B1ih抗體對(duì)重組蛋白HeLa細(xì)胞毒性的阻斷作用。方法：1、IPTG誘導(dǎo)VVC硒。inBlike表達(dá)、Ni2+親和層析法純化、透析復(fù)性法復(fù)性，Westernblot鑒定

4、。2、綿羊紅細(xì)胞裂解實(shí)驗(yàn)檢測VVC‰1nBlih的溶血活性。3、流式細(xì)胞儀檢測WC脅m引岫作用于HeLa細(xì)胞后，細(xì)胞的凋亡及壞死率、細(xì)胞線粒體膜電位的變化及細(xì)胞內(nèi)活性氧的變化。4、純化VVCR‘dnBl‘k。免疫日本大耳兔制備VVCRi。訪B1ike多克隆抗體。5、硫酸銨鹽析法、SephadexG25分子篩法純化多克隆抗體，Westernblot鑒定重組蛋白的免疫原性，ELISA法確定抗體效價(jià)。6、流式細(xì)胞儀檢測多克隆抗體對(duì)VVC脅mB1疵細(xì)胞毒性的阻斷作用。結(jié)果：1、大腸桿菌E．coliBL21(DE3)(含pET．28a(+)．wC鼬。

5、訪B1瞅e)成功表達(dá)wcRi。訪B·Ⅱk。蛋白且目的蛋白分子量約為20kDa，其純度已達(dá)93．4％以上。2、VVC胝mB1船無溶血活性。3、VVC剮。訪B1婦對(duì)HeLa細(xì)胞具有細(xì)胞毒性：VVCRi。協(xié)B1詼。作用于HeLa細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡率明顯增大，HeLa細(xì)胞線粒體膜電位逐漸下降，細(xì)胞內(nèi)活性氧水平亦逐漸增加。4、成功制備VVC砌啪B1婦多克隆抗體。5、免疫印跡分析結(jié)果顯示多克隆抗體能夠特異性識(shí)別VVCm。inB1撤?？乖揖哂休^好的免疫反應(yīng)性，ELISA測定抗體效價(jià)為1：3200。溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文6、多克隆抗體能夠成功阻斷WC胝訊B

6、1ih對(duì)HeLa細(xì)胞的細(xì)胞毒活性。結(jié)論：WC黜。訪B1她無溶血活性；VVC硒cinBl婦對(duì)HeLa細(xì)胞具有細(xì)胞毒活性；蛋白作用于HeLa細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡率顯著增大，線粒體膜電位逐漸下降及細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)明顯升高；同時(shí)蛋白的細(xì)胞毒活性能被其相應(yīng)抗體成功阻斷。此段序列與創(chuàng)傷弧茵溶細(xì)胞素細(xì)胞毒活性相關(guān)，可能是溶細(xì)胞素發(fā)揮細(xì)胞毒活性的重要功能模序之一。關(guān)鍵詞：創(chuàng)傷弧菌；溶細(xì)胞素；類蓖麻毒素模序；多克隆抗體；凋亡；JC．1；ROS溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文Studyonthecelltoxicityofthelectin·-likedomainof

7、rvvhAObjectiveABSTRACT1．Thelectin-likedomainofrecombinantvibriovulnifiCUShemolysin(rvvhh)wasexpressed，purifiedandrenaturation．2．TocortfkrmwhethervVC黜。證B1垃。1娜hemolysisactivh3．Toclarifythemechanismofeellto．cityofthelectin-likedomainofrvvhA．4．Tostudytheblockingeffectofthedama

8、geofHeLacellsactedbyrabbitantibodyagainstVVC硒。iIlBI婦．Methods1．Inducedtheexpressionvectorp