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《綠僵菌侵染相關(guān)基因magas1克隆和功能分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、CloningandFunctionalAnalysisofaInfection-relatedgeneMagas1inMetarhiziumacridumAThesisSubmittedtoChongqingUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofScienceByXiangxianZhuSupervisedbyAss.Prof.YueqingCaoMajor:BiologyCollegeofBioengineeringofChongqingUniversity,C
2、hongqing,ChinaApril,2011中文摘要摘要綠僵菌(Metarhiziumacridum)屬于半知菌亞門綠僵菌屬，是一種致病力強(qiáng)的昆蟲病原真菌，具有對(duì)人、畜、農(nóng)作物等無毒，無殘毒、菌劑易生產(chǎn)及持效期長等優(yōu)點(diǎn)，具有廣闊的應(yīng)用前景。附著胞是昆蟲病原真菌重要的侵染結(jié)構(gòu)，在綠僵菌成功侵染寄主一系列復(fù)雜的過程中，孢子萌發(fā)并分化形成附著胞是關(guān)鍵.本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建了綠僵菌在附著胞形成階段的均一化cDNA文庫，本研究從該文庫中挑選了一個(gè)附著胞期間特異表達(dá)的基因Magas1，克隆了該基因的全長cDNA序列(GenBank登陸號(hào)：DQ496227)，生物信息學(xué)分析顯示
3、該基因編碼317個(gè)氨基酸，含有954bpORF框，同源性分析結(jié)果表明，Magas1編碼的蛋白質(zhì)與Aspergillusfumigatus中的mas1(XP747144)及Magnaporthegrisea中的gas2(AF26-4035)等均有很高的同源性。半定量RT-PCR分析結(jié)果顯示該基因在附著胞期間表達(dá)量最高，在孢子萌發(fā)初期及菌絲時(shí)期亦有低水平的表達(dá)，在其它時(shí)期如體內(nèi)菌絲時(shí)期、培養(yǎng)基上產(chǎn)孢時(shí)期及蟲體體表產(chǎn)孢時(shí)期幾乎不表達(dá)。以Magas1基因的啟動(dòng)子構(gòu)建的Magas1-EGFP融合表達(dá)載體，通過激光共聚焦顯微鏡檢測發(fā)現(xiàn)到綠色熒光融合蛋白定位于附著胞的細(xì)胞質(zhì)。
4、將該基因敲除后，與野生型相比，Magas1基因突變株在1/4SDAY培養(yǎng)基上產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)生成延遲，而兩者在孢子萌發(fā)率及附著胞形成率上并無顯著差異。毒力測試結(jié)果表明突變菌株對(duì)東亞飛蝗的毒力比野生型顯著下降，說明Magas1是綠僵菌的一個(gè)毒力因子，而突變菌株膨脹壓下降表明影響真菌穿透寄主體表。對(duì)該基因的深入研究有助于了解昆蟲病原真菌的形成及侵入機(jī)理。關(guān)鍵詞：綠僵菌，Magas1，附著胞，致病性I重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文II英文摘要ABSTRACTMetarhiziumacridum,belongingtoMetarhiziumspp,isanentomopathogenic
5、fungiwithvirulence.Ithastheadvantagesofnoresidue,agentseasytoproduceandlongerpersistence,havingbroadapplicationprospects.Appressoriumisoneofthemostimportantstructuresinentomophthogenicfungus.TheformationofappressoriaarethekeystepduringthesuccessfullyinfectionofM.acridum.ThecDNAlibrar
6、yofM.acridumgerminatinganddifferentiatingonlocustwinghasbeenconstructedinourlaboratory.Inthisstudy,theMagas1geneGenBankaccessionnumber:DQ496227)wasselectdfromthislibraryforfurtheranalysis.TheMagas1genehasanopenreadingframeof954bpencodingaproteinof317aminoacidresidues.Homologyanalysis
7、showedhighlysimilaritywithgas2(AF264035)inMagnaporthegriseaandmas1(XP747144)inAspergillusfumigatusbyNCBIblast.Semi-quantitativeRT-PCRanalysisshowsstrongexpressionoftheMagas1geneduringappressoriumformationstageoftheinfectionprocess,andweaksignaloftheMagas1geneingerminatedsporesandhyph
8、ae.TheMagas1
