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1、上海海洋大學碩士學位論文學校代碼：10264研究生學號：M150101035上海海洋大學碩士學位論文中華鱉figlɑ基因的克隆及其在性腺中的表達題目：分析CloningandGonadalExpressionAnalysisof英文題目：figlɑGeneinChineseSoft-shellTurtle(Pelodiscussinensis)專業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖研究方向：種質(zhì)資源與遺傳育種姓名：趙巖巖指導教師：朱新平研究員徐紅艷研究員二O一八年五月二十五日上海海洋大學碩士學位論文上海海洋大學學位論文原創(chuàng)性聲
2、明本人鄭重聲明：我恪守學術道德，崇尚嚴謹學風。所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內(nèi)容負責，并完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學學位論文版權使用授權書學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權上海
3、海洋大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。保密□，在年解密后適用本版權書。本學位論文屬于不保密□學位論文作者簽名：指導教師簽名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大學碩士學位論文上海海洋大學碩士學位論文答辯委員會成員名單姓名工作單位職稱備注李桂峰中山大學教授主席劉麗華南農(nóng)業(yè)大學教授委員朱華平珠江水產(chǎn)研究所研究員委員珠江水產(chǎn)研究所答辯地點答辯日期2018.5.28綜合樓一樓會議室上海海洋大學碩士學位論文中華鱉figlɑ基因的克隆及
4、其在性腺中的表達分析摘要figlɑ（factorinthegermlinealpha）是bHLH（basichelix-loop-helix，堿性螺旋-環(huán)-螺旋）家族的一員，在動物的生殖發(fā)育調(diào)控過程中起著極為重要的作用，特別是在大部分脊椎動物的卵泡形成及卵巢發(fā)育中起著重要的調(diào)控作用。figla基因具有高度保守的bHLH結(jié)構(gòu)域，已在部分脊椎動物中得到鑒定與分析。中華鱉（Pelodiscussinensis）是爬行類動物中較為普遍的種類，因其具有極高的藥用和營養(yǎng)價值，導致其資源的過度開發(fā)利用及環(huán)境的惡化，致
5、使中華鱉種質(zhì)退化嚴重。因此利用傳統(tǒng)選育與現(xiàn)代細胞、基因工程等育種技術相結(jié)合的新方法進行良種培育已變得至關重要。生殖細胞是育種新技術研究的細胞基礎，中華鱉生殖細胞發(fā)育分化的研究是進一步了解其生殖發(fā)育調(diào)控機制的前提。本論文以中華鱉為實驗模型，對figla基因在其生殖細胞發(fā)育中的表達模式進行了初步分析，詳細的工作內(nèi)容如下：1.中華鱉figla基因的克隆及分析本研究克隆并分析了中華鱉figlɑ基因的部分cDNA序列，該序列長度為714bp，其中包含完整開放閱讀框642bp，3’端非編碼區(qū)72bp；共編碼213個
6、氨基酸，包含一個高度保守的bHLH結(jié)構(gòu)域。Figla氨基酸序列比對結(jié)果顯示，其蛋白序列與西部錦龜同源性最高，達93%；此外，NJ系統(tǒng)進化樹的分析結(jié)果顯示，中華鱉Figlɑ蛋白與哺乳類、鳥類的聚為一支。2.中華鱉figlɑ的組織特異性分析半定量PCR和熒光定量PCR（qRT-PCR）結(jié)果表明：中華鱉figlɑ基因mRNA主要在卵巢和精巢中表達，其中在卵巢中表達較強，精巢中表達較弱，而在其它體組織中幾乎不表達。3.中華鱉figlamRNA在卵巢中的表達分布情況由中華鱉卵巢組織的化學和熒光原位雜交結(jié)果可知：中
7、華鱉figlɑmRNA在卵子發(fā)生過程中的各期卵泡中均有信號，其中在初級卵母細胞（Ⅱ-Ⅴ期）中的信號最強，且主要定位在卵母細胞胞質(zhì)中；在生長期卵母細胞（Ⅵ-Ⅸ期）發(fā)育至成熟卵母細胞（Ⅹ期）的過程中，figlɑmRNA分布在卵母細胞胞質(zhì)及其外周的濾泡細胞中，且在卵母細胞胞質(zhì)中的信號逐漸減弱，在濾泡細胞中的信號逐漸增強。研I上海海洋大學碩士學位論文究結(jié)果表明figlɑ基因可能主要調(diào)控中華鱉卵泡形成及卵巢的發(fā)育。4.中華鱉figlamRNA在精巢中的表達分布情況中華鱉figlamRNA在精子發(fā)生中各時期的細胞中
8、表現(xiàn)出動態(tài)的變化。中華鱉figlɑmRNA在精母細胞和精子細胞中的信號較強，在精原細胞中的信號較弱，在體細胞中幾乎檢測不到信號。研究結(jié)果表明figlɑ基因可能在精母細胞和精子細胞發(fā)育過程中也起到一定的調(diào)控作用。綜上所述，figlɑ基因可作為中華鱉卵泡和卵母細胞發(fā)育的關鍵基因，參與調(diào)控卵泡的形成及卵巢發(fā)育，同時可能在中華鱉精子發(fā)生過程中也起到一定的調(diào)控作用。本研究為進一步開展中華鱉及其它爬行動物的配子生成、性腺發(fā)育與分化等研究奠定了基礎。關鍵
