xpd基因的克隆及其在惡性黑素瘤細(xì)胞中的表達(dá)

xpd基因的克隆及其在惡性黑素瘤細(xì)胞中的表達(dá)

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1、XPD基因的克隆及其在惡性黑素瘤細(xì)胞中的表達(dá)計(jì):學(xué)位論文:24頁表格:8個插圖:6幅王月指導(dǎo)教師:高明陽教授申請學(xué)位級別:碩士學(xué)位專業(yè)名稱:皮膚病與性病學(xué)論文提交日期:2012年4月論文答辯日期:2012年5月學(xué)位授予單位:大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)位授予日期:2012年6月評閱人:答辯委員會主席:獨(dú)創(chuàng)性聲明刪本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得大連醫(yī)科大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本

2、研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名:簽字日期:承筑1年f月臼日目錄一、摘要??????????????????????????1(一)中文摘要??????????????????????1(二)英文摘要??????????????????????3二、正文??????????????????????????5(一)前言????????????????????????5(二)材料與方法???j?????????????????··6(三)結(jié)果???????????????????????11(四)討論???????

3、????????????????12(五)結(jié)論???????????????????????14(六)參考文獻(xiàn)?????????????????????15三、綜述??????????????????????lid0a-00ID?17(一)綜述??????????????????????17(二)參考文獻(xiàn)?????????????????????20四、附錄?????????????????????????22五、致謝????ooooo??????????oooo???????24XPD基因的克隆及其在惡性黑素瘤細(xì)胞中的表達(dá)碩士生姓名:指導(dǎo)教師:指導(dǎo)

4、小組:專業(yè)名稱:王月高明陽教授劉世海博士皮膚病與性病學(xué)摘要背景:XPD是核酸切除修復(fù)過程的主要蛋白,因此XPD與腫瘤的關(guān)系越來越受到研究者的重視。因此XPD與腫瘤的關(guān)系越來越受到研究者的重視。對皮膚惡性黑素瘤基因易感性分子機(jī)制的研究表明XPD是皮膚惡性黑素瘤易感的生物標(biāo)志。DNA修復(fù)酶的調(diào)控,是預(yù)防腫瘤和治療的關(guān)鍵,HIF.1在參與調(diào)控XPD修復(fù)中起著重要作用,增加了HIFl和spl他們重疊的結(jié)合位點(diǎn)之間的競爭,紫外線誘導(dǎo)的磷酸化增強(qiáng)了HIF一1蛋白直接結(jié)果,而XPD基因啟動子取悅的HRE,在編碼DNA修復(fù)蛋白的基因中,是DNA修復(fù)機(jī)制的一個關(guān)鍵調(diào)節(jié)

5、機(jī)制。在XPD基因中的DNA修復(fù)因子TFIIH存在亞基突變。許多人著色性干皮病患者的致病與XPD點(diǎn)突變R683W有著某種關(guān)聯(lián)。然而,有明顯的異質(zhì)性,有研究對XPD基因中的TFIIH酶功能的突變的效果發(fā)現(xiàn),每一個突變,表現(xiàn)出獨(dú)特的生化屬性。XPD751密碼子的Gin/Gin基因型是男性惡性黑素瘤高風(fēng)險(xiǎn)的有意義基因標(biāo)志,Lys/Gln基因型對預(yù)測惡性黑素瘤惡化有重要意義。在本實(shí)驗(yàn)中,我們克隆了XPD,構(gòu)建了pEGFP.N1/XPD及pcDNA3.1(+)/XPD重組表達(dá)質(zhì)粒,并轉(zhuǎn)染至人惡性黑素瘤細(xì)胞,觀察它們的表達(dá)情況及其在惡性黑素瘤細(xì)胞內(nèi)定位,利用MT

6、T檢測細(xì)胞的增殖力,以討論XPD對惡性黑素瘤細(xì)胞的生物學(xué)影響及其可能的功能。目的:克隆XPD基因并探討其在惡性黑素瘤細(xì)胞內(nèi)的定位及其功能。方法:克隆出人全長XPDcDNA,將該基因構(gòu)建入pEGFP-N1/XPD質(zhì)粒,利用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染pEGFP.N1/XPD及pcDNA3.1(+)/XPD至人惡性黑素瘤A375細(xì)胞,檢測XPD蛋白的表達(dá),然后利用GMl30和KDEL進(jìn)行染色,觀察基因XPD的細(xì)胞定位。細(xì)胞增殖力檢測使用MTT法。結(jié)果:1.培養(yǎng)Hela細(xì)胞并進(jìn)行RNA逆轉(zhuǎn)錄,PCR克隆了人全長XPDcDNA,電泳在約1234bp處見條帶。2.將XPD基因

7、連入PEGFP載體并測序鑒定,測序結(jié)果與GenBank中人XPD進(jìn)行比對,結(jié)果一致。4.XPD在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的高表達(dá)。5.PEGFP/XPD重組質(zhì)粒定位于A375細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中。6.與轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)組和空白對照組相比,轉(zhuǎn)染pcDNA3.I(+)/XPD組惡性黑素瘤A375細(xì)胞數(shù)較少,XPDA375細(xì)胞的生長被XPD基因抑制。結(jié)論:1.從Hela細(xì)胞中成功克隆出同源盒基因XPD。2.構(gòu)建pEGFP-N1/XPD質(zhì)粒。3.用免疫熒光染色證實(shí)XPD基因定位于惡性黑素瘤A375細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中。4.A375細(xì)胞的生長被XPD基因抑制。關(guān)鍵詞XPD;克隆

8、;惡性黑素瘤細(xì)胞;功能2,_’1nl1●.1r、1L10neOIIIUmanxerodermaplgment

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