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《丙泊酚對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠腎損傷保護(hù)作用及機(jī)制的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、·中文論著摘要·丙泊’酚對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠腎損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究目的內(nèi)毒素血癥常見(jiàn)于嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷、休克、重癥感染等應(yīng)激狀態(tài)下，來(lái)自于感染部位的LPS大量進(jìn)入體內(nèi)，并引起炎癥介質(zhì)的大量合成、釋放，使包括腎臟在內(nèi)的多器官受累，在急性損傷的發(fā)生、發(fā)展中起著不可忽視的作用。腎臟又是代謝產(chǎn)物及毒素排泄的主要途徑，LPS亦可經(jīng)腎小管重吸收后，使腎小管上皮細(xì)胞處在高濃度LPS微環(huán)境中，可能對(duì)腎小管上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生重要的影響，在AKI的發(fā)生、發(fā)展中起著一定的作用n1。急性腎損傷所致的急性腎功能衰竭的特征性改變就是腎小球?yàn)V過(guò)率下降及腎小
2、管功能障礙，完善的尿液濃縮與鈉離子重吸收的腎小管功能依賴于水通道蛋白的參與及功能性表達(dá)。AQPs(水通道蛋白)分布廣泛，腦、肺、腎等臟器組織均有不同亞型分布，對(duì)水和甘油等小分子物質(zhì)代謝有重要的調(diào)節(jié)作用，是保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要物質(zhì)，也受多種因素影響其結(jié)構(gòu)和功能，從而改變對(duì)水的通透性，影響器官水和小分子物質(zhì)的代謝，同時(shí)也是導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因素。1992年P(guān)reston等發(fā)現(xiàn)腎臟AQP，這一發(fā)現(xiàn)合理地解釋了腎臟自由水代謝的問(wèn)題。腎臟是水代謝的主要器官，AQPs在腎臟中的研究對(duì)揭示腎臟的病理生理改變具有重要作用位1。近期有報(bào)道藥物、缺
3、血等引起的腎功能衰竭中AQP2表達(dá)明顯下調(diào)，AQP2的這一變化與腎集合管上皮細(xì)胞損傷程度密切相關(guān)，恢復(fù)早于形態(tài)學(xué)改變D一1。已證明AQP2是集合管上皮細(xì)胞上最重要，且是惟一受AVP調(diào)節(jié)的水通道蛋白。分布在細(xì)胞頂質(zhì)膜及細(xì)胞內(nèi)小泡。AVP對(duì)AQP2的調(diào)節(jié)有2種方式：(1)短期調(diào)節(jié)作用，AQP2氨基酸序列中從253-256位含蛋白激酶A(PKA)磷酸化部位，AVP與V2R結(jié)合后激活A(yù)C—cAMP．．PKA信號(hào)傳導(dǎo)途徑，導(dǎo)致AQP2磷酸化，是含AQP2的細(xì)胞內(nèi)小泡向細(xì)胞項(xiàng)質(zhì)膜轉(zhuǎn)移并與之熔接，從而使細(xì)胞膜對(duì)水的滲透性迅速增加，這種調(diào)節(jié)作用
4、可在數(shù)分鐘內(nèi)發(fā)生_·61。(2)長(zhǎng)期調(diào)節(jié)作用：V2R穩(wěn)定激活可導(dǎo)致AQP2合成增加，AVP是通過(guò)V2RcAMP-PKA信號(hào)傳遞途經(jīng)致細(xì)胞核I勾cAMP結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子磷酸化及cjun／cFos基因表達(dá)，影響AQP2mRNA轉(zhuǎn)錄及AQP2蛋白合成，從而上調(diào)AQP2的總豐度，因而改變腎臟集合管對(duì)水的滲透性，AQP2mRNA的變化可在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)口J～。近年研究發(fā)現(xiàn)AQPs可以改善一些病理過(guò)程中臟器如肺、腦、腎的水及小分子物質(zhì)的代謝，減少這些相應(yīng)臟器的水腫和損傷，水通道蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞移行對(duì)急性腎損傷腎小管功能的恢復(fù)和重建很重要，與預(yù)防和
5、治療這些重要臟器損傷關(guān)系密切n帕，研究其在這些病理過(guò)程中功能和結(jié)構(gòu)的變化有助于指導(dǎo)用藥。早期發(fā)現(xiàn)和治療腎功能異常不僅對(duì)于糾正休克具有作用，對(duì)于內(nèi)臟器官保護(hù)具有更加重要的意義。水通道蛋白可以受多種因素影響，但是對(duì)其有調(diào)節(jié)作用的藥物并不多，其阻斷劑也多為重金屬物質(zhì)，本身就對(duì)生物體有損傷，少數(shù)藥物如糖皮質(zhì)激素?fù)?jù)報(bào)道有一定的水通道蛋白調(diào)節(jié)作用。目前研究表明麻醉藥如異氟烷、七氟烷、利多卡因和丙泊酚等對(duì)心、腦、肺和腎等臟器的不同損傷具有保護(hù)作用，丙泊酚作為一種靜脈麻醉藥具有鎮(zhèn)靜催眠作用，廣泛應(yīng)用于臨床，有報(bào)道在內(nèi)毒素血癥肺損傷時(shí)丙泊酚可以通
6、過(guò)調(diào)節(jié)AQPl起到保護(hù)作用n習(xí)，但對(duì)大鼠內(nèi)毒素血癥腎損傷是否通過(guò)調(diào)節(jié)AQPs起到保護(hù)作用尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)文獻(xiàn)并模擬病人內(nèi)毒素血癥觀察所見(jiàn)建立大鼠內(nèi)毒素血癥模型n3’¨1，12小時(shí)后行功能檢查并留取腎臟標(biāo)本，病理檢查腎臟損傷情況以及觀察腎臟超微結(jié)構(gòu)的改變n51，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)、Western印跡雜交技術(shù)、免疫組織化學(xué)染色技術(shù)等檢測(cè)AQP2基因mRNA和AQP2蛋白、TNF-．a(chǎn)、ICAM—l、Bcl2、Bax、Caspase3蛋白等在大鼠內(nèi)毒素血癥腎損傷過(guò)程中表達(dá)的變化，細(xì)胞凋亡程度：同時(shí)觀察在大鼠內(nèi)毒素血癥腎損傷過(guò)程
7、中應(yīng)用公認(rèn)的具有抗炎抗氧化作用的靜脈麻醉藥丙泊酚n6’忉，采用預(yù)處理，同時(shí)給藥和后處理的不同時(shí)間給藥方式，觀察其在大鼠內(nèi)毒素血癥腎損傷過(guò)程中對(duì)腎臟功能和AQP2基因mRNA、AQP2蛋白、IC／扭!一l、Bcl2、Bax、Caspase3和細(xì)胞凋亡程度的影響，從分子生物學(xué)角度觀察和探討不同丙泊酚給藥時(shí)間對(duì)大鼠內(nèi)毒素血癥腎損傷的作用，為指導(dǎo)臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)包括三部分：l、內(nèi)毒素血癥大鼠腎臟AQP2基因表達(dá)及結(jié)構(gòu)功能變化；2、丙’泊酚對(duì)大鼠內(nèi)毒素血癥腎組織AQP2基因表達(dá)及結(jié)構(gòu)功能的影響；3、丙泊酚對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠腎臟細(xì)
8、胞凋亡的影響。實(shí)驗(yàn)材料1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選取48只Wistar大鼠(體重在200曠3009之間)，由沈陽(yáng)軍區(qū)總院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2實(shí)驗(yàn)試劑aquaporin2一抗：兔抗鼠aquaporin2，試劑盒(武漢博士德公司)；二抗：羊抗兔IgG，試劑盒(美國(guó)西格瑪公司)：異丙
