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《棉花ghmyb5基因克隆及其啟動(dòng)子功能分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、摘要MYB基因是植物最重要的轉(zhuǎn)錄因子家族之一，廣泛參與植物對(duì)非生物脅迫的應(yīng)答、植物形態(tài)建成、次生代謝調(diào)節(jié)等過(guò)程。本文根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室測(cè)序分析的陸地棉MaxxaBAC文庫(kù)，利用RT-PCR技術(shù)由海島棉中克隆出一個(gè)新的MYB轉(zhuǎn)錄因子基因GbMYB5（Genbank登錄號(hào)為：JF820389），以期為MYB基因子在植物抗非生物脅迫方面的研究提供理論基礎(chǔ)。研究進(jìn)展如下：1、RT-PCR檢測(cè)了GbMYB5在棉花不同器官組織中的表達(dá)情況。結(jié)果表明，GbMYB5基因在植物的莖、葉、蕾、絮和種子中均有表達(dá)，尤以在葉子中的表達(dá)水平最高。2、RT-PCR對(duì)GbMYB5基因在不
2、同脅迫處理下的表達(dá)情況進(jìn)行分析。脅迫實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，重金屬脅迫可短暫抑制GbMYB5基因表達(dá)，但表達(dá)量在處理48h后回升至正常水平。PEG、ABA和GA誘導(dǎo)均可增強(qiáng)GbMYB5基因的表達(dá)。3、構(gòu)建了植物表達(dá)載體pCAMBIA2301-GbMYB5，其中含有CaMV35s啟動(dòng)子，具有卡那霉素抗性篩選標(biāo)記。經(jīng)過(guò)PCR檢測(cè)及雙酶切鑒定，構(gòu)建的載體符合預(yù)期設(shè)計(jì)。4、通過(guò)熱激法將pCAMBIA2301-GbMYB5質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404，PCR檢測(cè)結(jié)果表明含有目的基因的質(zhì)粒載體成功導(dǎo)入到了農(nóng)桿菌中。用含pCAMBIA2301-Gb的根癌農(nóng)桿菌侵染煙草，在
3、篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)，PCR鑒定14株為陽(yáng)性。5、將抗性苗移栽至溫室培養(yǎng)，提取煙草總RNA，進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，結(jié)果表明目的基因已在煙草轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)，RT-PCR鑒定9株在轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)。6、為明確GbMYB5基因的啟動(dòng)子功能，構(gòu)建了含GUS報(bào)告基因植物表達(dá)載體PBI101-T，并轉(zhuǎn)化擬南芥。對(duì)擬南芥抗性株系進(jìn)行GUS組織化學(xué)染色。結(jié)果表明，在GbMYB5基因的啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下，GUS報(bào)告基因主要在轉(zhuǎn)基因擬南芥的根部，以及幼苗期的葉片中表達(dá)。關(guān)鍵詞：棉花，轉(zhuǎn)錄因子，GbMYB5基因，煙草轉(zhuǎn)化，非生物脅迫，啟動(dòng)子，擬南芥，GUS組織化學(xué)染色I(xiàn)AbstractMY
4、Btranscriptionfactorgeneisoneofthelargestfamiliesinplants,whichinvolvedinrespondingtoAbioticStress,regulationofsecondarymetabolismandtheformationofplantorgans.Inthispaper,basedonthepreviousresearchofourlab,anewMYBtranscriptionfactorgeneGbMYB5（GenbankNo.:JF820389）wasisolatedfromG
5、ossypiumbarbadensebyRT-PCR,Themainresultsofthisstudyareasfollows:1、TheexpressionpatternofGbMYB5indifferentorganswasstudiedusingRT-PCR.TheresultsshowedthatGbMYB5wasexpressedinstems,leaves,buds,lintsandseeds,whereasGbMYB5genewashighlydetectedinleaves.2、TheexpressionofGbMYB5underab
6、ioticstresswasdetectedbyRT-PCR.TheexpressionofGbMYB5genewasinhibitedin24hafterheavymetalsstressandrecovertonormallevelin48h.WhereastheexpressionofGbMYB5geneincreasedsignificantlyunderPEG,ABAofGAtreatment.3、AplantexpressionvectorpCAMBIA2301-GbMYB5wassuccessfullyconstructed,whichd
7、rivenbyCaMV35SpromoterandhaveaKanamycinresistanceselectionmarker.4、Byheatshocking,wetransformedtheplasmidvectorspCAMBIA2301-GbMYB5intointoAgrobacteriumLBA4404successfully.TheAgrobacteriumstrainscontainingpCAMBIA2301-GbMYB5infecttobaccoleave,14kan-resistantplantswerescreened.5、Th
8、etotalRNAwasextractedfromtheleavesofpositivetob
