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1、分類(lèi)號(hào)：密級(jí)：學(xué)校代碼：學(xué)號(hào)：10165201111212逢掌何耗犬學(xué)碩士學(xué)位論文⑨葡萄AC01基因啟動(dòng)子克隆及功能分析作者姓名：學(xué)科、專(zhuān)業(yè)：研究方向：導(dǎo)師姓名：2014年03月學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明測(cè)N,刺26't3598本人承諾：所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所取得的研究成果。論文中除特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含他人和其他機(jī)構(gòu)已經(jīng)撰寫(xiě)或發(fā)表過(guò)的研究成果，其他同志的研究成果對(duì)本人的啟示和所提供的幫助，均已在論文中做了明確的聲明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：學(xué)位論文版權(quán)的使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解遼
2、寧師范大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，及學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交復(fù)印件或磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱。本文授權(quán)遼寧師范大學(xué)，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)并進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文，并且本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。保密的學(xué)位論文在解密后使用本授權(quán)書(shū)。學(xué)位論文作者簽名：碰指導(dǎo)教師簽名：簽名日期：2Dl華年辦名日遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要?dú)W洲葡萄(Vitisvinifera)果實(shí)內(nèi)的糖分含量高、口感香甜，是人們釀制葡萄酒的主要原材料之
3、一，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。但其抗逆性較差，生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中易受到病蟲(chóng)害及環(huán)境變化等脅迫的侵害，導(dǎo)致其品質(zhì)和產(chǎn)量受到嚴(yán)重的影響。研究表明，乙烯在植物抵抗逆境脅迫的過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，而在乙烯的生物合成途徑中ACC氧化酶發(fā)揮了十分重要的作用，它能直接催化ACC(1．氨基環(huán)丙烷．1．羧酸)轉(zhuǎn)變?yōu)橐蚁虼?，研究ACC氧化酶基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制具有非常重要的意義。本實(shí)驗(yàn)選取歐洲葡萄中AC01基因的啟動(dòng)子進(jìn)行克隆和功能分析，從而為葡萄抗逆性研究提供理論依據(jù)。利用普通PCR技術(shù)，從歐洲葡萄基因組DNA中克隆獲得VvAC0
4、1基因啟動(dòng)子序列，長(zhǎng)度為1956bp，在順式作用元件分析網(wǎng)站PlantCARE中分析啟動(dòng)子序列中包含的元件，發(fā)現(xiàn)該基因啟動(dòng)子序列中包含多種植物逆境脅迫響應(yīng)元件，如抗氧化脅迫響應(yīng)元件、熱擊脅迫響應(yīng)元件等：還包含多種植物激素響應(yīng)元件，如脫落酸響應(yīng)元件、生長(zhǎng)素響應(yīng)元件、赤霉素響應(yīng)元件及水楊酸響應(yīng)元件。根據(jù)VvAC01基因啟動(dòng)子中順式作用元件的分析結(jié)果，對(duì)該啟動(dòng)子序列進(jìn)行5’缺失片段擴(kuò)增，獲得了4條不同長(zhǎng)度的VvAC01基因啟動(dòng)子5’缺失片段(VvAC01P1～MCDJP4)。將VvAC01基因啟動(dòng)子的4條5’缺失片段
5、分別替換PBl221．LUC表達(dá)載體的35S啟動(dòng)子序列，構(gòu)建了重組的表達(dá)載體。利用PEG．Ca2+介導(dǎo)原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化的方法，把重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)染至擬南芥原生質(zhì)體中培養(yǎng)，通過(guò)檢測(cè)LUC報(bào)告基因的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)VvAC01基因啟動(dòng)子Pl～P4段均能調(diào)控下游LUC報(bào)告基因的表達(dá)，并且發(fā)現(xiàn)VvAC01基因啟動(dòng)子的．1483~-515bp區(qū)域有抑制下游基因表達(dá)的作用；．5l5～88bp區(qū)域有促進(jìn)下游基因表達(dá)的作用。綜上所述，本實(shí)驗(yàn)初步確定了VvAC01基因啟動(dòng)子序列中順式作用元件的種類(lèi)、數(shù)量及特性，為進(jìn)一步研究VvACO基因
6、的表達(dá)調(diào)控機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，為提高葡萄抗逆性的研究提供理論參考。關(guān)鍵詞：歐洲葡萄；AC01基因；啟動(dòng)子；瞬時(shí)表達(dá)葡萄ACOI基因啟動(dòng)子克隆及功能分析CloningandFunctionalAnalysisofAC01PromoterinVit&viniferaAbstractVitisvinifera，whichisoneofthemainrawmaterialsofproducingwineandhashigheconomicvalue，containshighcontentofsugarandtastess
7、weet．WhiletheresistanceofVitisviniferaiSpoorlikethediseasescausedbyinsectsandenvironmentalchangesinitswholelife，whichwillaffectitsqualityandyieldseriously．Studieshaveshownthatethyleneplaysanimportantrolesinplantresistances，andACCoxidaseisthekeyenzymeinEthyle
8、nebiosynthesis，whichcancatalyticACC(1-aminocyclopropane—l·carboxylicacid)toethylenedirectly．TheithasimportantsignificancetostudythemolecularmechanismsofexpressionandregulationofACCoxidase．Inthis
